fa کلون و بیان فوتوپروتئین اکورین با استفاده از دنباله اینتئین بیوشیمی Biochemistry. Cell Biology and Genetics پژوهشي Original <p><u><strong>زمینه:</strong></u> اینتئین (INT) بخش‌های درونی پروتئین است که می‌تواند در طی فرایند پیرایش پروتئین، خود را از پروتئین نابالغ جداکند. این توالی برای جدا شدن، احتیاج به آنزیم یا کوفاکتور خاصی ندارد. از این توالی پروتئینی و ویژگی برش خود به خودی آن، در اثر اعمال تغییر دما، pH و یا القای تیولی در جهت تخلیص پروتئین استفاده می‌شود. مزیت این روش نسبت به بقیه روش‌های تخلیص پروتئین، عدم احتیاج به آنزیم‌های پروتئازی و مراحل حذف پروتئاز می‌باشد که این روش را از لحاظ اقتصادی حائز اهمیت می‌کند. در تحقیق حاضر فوتوپروتئین اکورین به‌صورت ملکولی با INT هیبرید شده و میزان بیان آن مورد ارزیابی قرار گرفته است.</p> <p><u><strong>مواد و روش‌ها:</strong></u> در این تحقیق ژن رمز کننده اکورین که در مطالعات قبلی درون وکتور pET21a کلون شده بود با استفاده از پرایمرها و آنزیم‌های محدودگر اختصاصی درون وکتور pTYB21، که حاوی دنباله INT است، کلون گردید. سپس وکتور pTY-aequorin حاصله به باکتری E.coli سویه بیانی ER2566 انتقال داده شد و با تکنیک‌های الکتروفورز (Electerophoresis)، وسترن بلات (Western Blot) و تعیین ترادف (Sequencing)، صحت کلون‌ها بررسی گردید.</p> <p><u><strong>یافته‌ها:</strong></u> ژن به رمز درآورنده فوتوپروتئین اکورین بین جایگاه های آنزیمی SapI و PstI درون وکتور pTYB21 به‌صورت صحیح کلون گردید و بیان پروتئین هیبریدی اکورین- اینتئین با استفاده از روش‌های مرسوم تأیید گردید.</p> <p><u><strong>نتیجه‌گیری:</strong></u> ساخت سازه ژنی فوتوپروتئین اکورین، در حالت هیبریدی و متصل به INT با استفاده از روش‌های ملکولی تأیید شد. همچنین میزان بیان اکورین در حالت متصل شده با INT، درصد بیان بیش از 25 درصد مجموعه پروتئین‌های سلولی را نشان می‌دهد.</p> <p><strong><u>Background:</u></strong> Intein (INT), is the internal parts of the protein which can be separated from the immature protein during protein splicing process. This sequence requires no specific enzyme or cofactor for separation. This protein sequence and their characteristic of self-cleavage by thiol induction, temperature and pH changes is used for protein purification. The advantage of this method compared to the other protein purification methods is that it doesn&rsquo;t require any protease enzyme and protease removal steps that make this method important economically. In this study, aequorin photoprotein was hybridized with INT in molecular form and its expression was evaluated.</p> <p><strong><u>Materials and Methods:</u></strong> In this study, aequorin coding gene that was cloned in pET21-a in the previous studies, was cloned in pTYB21 vector containing INT tag by specific primers and restriction enzymes. Then the resulting pTY-aequarin was transformed to the ER2566 expression strain and cloning accuracy was confirmed by electrophoresis, western blotting and sequencing.</p> <p><strong><u>Results:</u></strong> The photoprotein aequorin was cloned into SapI/PstI restriction site of pTYB21 plasmid accurately and successfully. Aequorin- INT hybrid protein expression confirmed using traditional methods.</p> <p><strong><u>Conclusion:</u></strong> The photoprotein aequorin constract in fused with INT confirmed by molecular methods. Also rate of Aequorin- INT expression determined about %25 of cell total protein.</p> اینتئین, پیرایش پروتئین, کلون, بیان, فوتوپروتئین اکورین Intein, Protein splicing, Cloning, Expression, Aequorin photoprotein 1168 1175 http://ismj.bpums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3-547&slc_lang=fa&sid=1 Elah sadat Seyed Hosseini الهه سادات سیدحسینی 570031947532846008040 570031947532846008040 No Department of Bioscience and Biotechnology, Mallek Ashtar University of Technology, Tehran, IRAN پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران Mehdi Zeinoddini مهدی زین الدینی zeinoddini52@mut.ac.ir 570031947532846008041 570031947532846008041 Yes Department of Bioscience and Biotechnology, Mallek Ashtar University of Technology, Tehran, IRAN پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران Zeinoddini Fallah جلیل فلاح 570031947532846008042 570031947532846008042 No Department of Bioscience and Biotechnology, Mallek Ashtar University of Technology, Tehran, IRAN پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران Alireza Saeedinia علی رضا سعیدی نیا 570031947532846008043 570031947532846008043 No Department of Bioscience and Biotechnology, Mallek Ashtar University of Technology, Tehran, IRAN پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران