زمینه: بیماری‌های عفونی از مهم‌ترین علل مرگ ومیر در دنیا به‌ویژه در کشورهای در حال توسعه هستند، آنچه در سال‌های اخیر جامعه پزشکی را به شدت نگران کرده پدیده مقاومت آنتی‌بیوتیکی است. باسیل‌های گرم منفی با مقاومت چنددارویی، از پاتوژن‌های مهم در بیمارستان‌ها هستند و سبب مرگ ومیر بالا می‌شوند. هدف اصلی این پژوهش تعیین الگوی مقاومت میکروبی باسیل‌های گرم منفی شایع در بیماران بستری در بیمارستان ولی‌عصر (عج) اراک بود. مواد و روش‌ها: این مطالعه توصیفی – تحلیلی از نوع مقطعی در سال‌های 1391-1389 در بیمارستان ولی‌عصر (عج) اراک انجام شد. در این مطالعه1120 نمونه مورد بررسی قرار گرفتند. باکتری‌ها از نمونه‌های مختلف شامل خون، ادرار، زخم، ترشحات تنفسی، مایع مغزی –نخاعی با روش استاندارد جدا، سپس با استفاده از روش دیسک دیفیوژن از نظر مقاومت آنتی‌بیوتیکی بررسی شدند. یافته‌ها: در این بررسی 737 مورد کشت مثبت از نمونه‌ها به‌دست آمد. به‌طور کلی 332 مورد باسیل گرم منفی از نمونه‌ها جدا گردید. بیشترین باکتری‌های گرم منفی از ادرار، زخم، خون، ترشحات تنفسی و کاتتر جدا شدند. شایع‌ترین پاتوژن‌ها به‌ترتیب شامل اشرشیا کولی، کلبسیلا پنومونیه، انتروباکتر، پسودومونا آئروژینوزا، آسینتو باکتر، سیترو باکتر و پروتئوس بودند. مقاومت بالا نسبت به سفالوسپورین‌های نسل سوم و کارباپنم‌ها در گونه‌های آسینتوباکتر دیده شد.بتالاکتامازهای وسیع الطیف ESBL در 4/51 درصد باکتری‌های گرم منفی مشاهده شد. نتیجه‌گیری: مقاومت آنتی‌بیوتیکی به‌ویژه مقاومت چند دارویی در بین میکروارگانیسم‌های این مرکز شایع است. مقاومت در کشور ما، مشابه سایر کشورها در حال افزایش است و توصیه به جلوگیری از مصرف غیرضروری آنتی‌ بیوتیک‌ها می‌شود.