RT - Journal Article T1 - Design and Evaluation of a PCR Method for Detecting White Spot Syndrome Virus in Shrimp JF - ISMJ YR - 2021 JO - ISMJ VO - 24 IS - 5 UR - http://ismj.bpums.ac.ir/article-1-1516-fa.html SP - 469 EP - 480 K1 - White Spot Syndrome Virus K1 - PCR K1 - Diagnosis AB - زمینه: ویروس سندروم لکه سفید، عامل بیماری لکه سفید در میگوها و بسیاری از سخت‌پوستان می‌باشد. این بیماری بسیار مسری است و در طی 3-10 روز در شرایط کشت طبیعی باعث مرگ‌و میر می‌شود، بنابراین، تشخیص زود هنگام این ویروس یک ضرورت می‌باشد. مواد و روش‌ها: برای 3 ناحیه از ژنوم ویروس و یک ناحیه از ژنوم میگو پرایمرهایی سازگار با هم طراحی شدند که بتوانند با هم در یک واکنش عملکرد داشته باشند.استخراج DNA از 40 نمونه میگوی مشکوک به بیماری انجام گردید. سپس پرایمرها به صورت تکی جهت تشخیص ویروس لکه سفید بهینه‌سازی شدند و پس از انتخاب مناسب‌ترین آن‌ها، تشخبص ویروس به صورت همزمان توسط دو جفت پرایمر انجام گردید. از پرایمرهای تکثیر کننده ژنوم میگو هم به‌عنوان کنترل داخلی استفاده شد. یافته‌ها: از بین پرایمرهای طراحی شده 3 جفت پرایمر که یک قطعه از ژنوم میگو و 2 قطعه از ژنوم ویروس را تکثیر می‌کردند انتخاب گردید. از 40 نمونه بررسی شده 28 نمونه مثبت (آلوده به ویروس) و 12 نمونه منفی بود که با نتایج به‌دست آمده با کیت مرجع مطابقت داشت. نتیجه‌گیری: جهت تشخیص ویروس، بررسی 2 ناحیه از ژنوم آن کافی می‌باشد و احتمال منفی کاذب را کاهش می‌دهد. همچنین استفاده از ژنوم میگو جهت کنترل مراحل استخراج DNA و PCR مفید می‌باشد. روش PCR تک مرحله‌ای نسبت به روش‌های دو مرحله‌ای (Nested PCR) بدلیل کاهش احتمال آلودگی و راحتی انجام آن اولویت دارد. LA eng UL http://ismj.bpums.ac.ir/article-1-1516-fa.html M3 10.52547/ismj.24.5.469 ER -