TY - JOUR JF - ISMJ JO - Iran South Med J VL - 18 IS - 1 PY - 2015 Y1 - 2015/4/01 TI - The role of His 16, Tyr 82 and Trp 86 in color shift, activity and thermostability of aequorin photoprotein TT - نقش اسیدهای آمینه هیستیدین 16، تیروزین 82 و تریپتوفان 86 در شیفت نوری، فعالیت و پایداری حرارتی فوتوپروتئین اکورین N2 - زمینه: اکورین فوتوپروتئینی حساس به کلسیم است که از آپوآکورین (189 اسید آمینه)، اکسیژن و کوالنترازین (کروموفور ایمیدازوپیرازین) تشکیل شده است. عملکرد این پروتئین نوری در حضور کلسیم، نشر نور آبی (469 نانومتر) است. مطالعات نشان داده است که سه اسید آمینه H16، Y82 و W86 در عملکرد و شیفت نوری پروتئین اکورین نقش دارد. در تحقیق حاضر به منظور بررسی ارتباط ساختار- عملکرد پروتئین از جهش‌های ترکیبی استفاده شد تا نقش و اهمیت جایگاه‌های مورد نظر، در حالت تک و ترکیبی، به‌دست آید. مواد و روش‌ها: با استفاده از روش جهش‌های هدفمند، جهش‌های تکی و ترکیبی در پلاسمید مورد نظر انجام گرفت و فوتوپروتئین اکورین در حالات تک جهشی و جهش‌های ترکیبی، به‌دست آمد. در مرحله بعد پایداری حرارتی و فعالیت نوری پروتئین‌های به‌دست آمده با استفاده از لومینومتر، اندازه‌گیری و شیفت نوری آن‌ها با استفاده از اسپکتروفلوریمتر، اندازه‌گیری شد. یافته‌ها: نتایج حاصله نشان داد که نقش جایگاه W86 در شیفت نوری و نقش H16 در عملکرد از سایر موقعیت‌های دیگر بالاتر است. همچنین پایداری حرارتی جهش اعمال شده در موقعیت W86 نسبت به سایر جهش‌ها عملکرد بهتری را نشان می‌دهد. نتیجه‌گیری: این تحقیق نشان داد که جایگاه اسید آمینه W86 در شیفت نوری و پایداری حرارتی اکورین، از Y82 و H16 بالاتر است و می‌توان از این جهش جهت تولید پروتئین کاراتر در راستای حسگری و سایر کاربردهای مربوطه استفاده نمود. SP - 37 EP - 45 AU - Ghanbartalab, Faeazeh AU - Zeinoddini, Mehdi AU - Hosseinkhani, Saman AU - Esmailinejad, Masoome AU - Hosseini, sayedealah AU - Laali, Masoome AD - Department of Genetic Engineering, Bioscience and Biotechnology Research Center, Mallek Ashtar University of Technology, Tehran KW - Aequorin KW - Mutation KW - Color shift KW - Thermostability UR - http://ismj.bpums.ac.ir/article-1-646-fa.html ER -