Iranian South Medical Journal

fa مقایسۀ وکتورهای بیانی pET32a و pET25b در بیان توالی پلی اپیتوپی سنتز شده از آنتی‌ژن‌های انگل لیشمانیا اینفانتوم Comparative Evaluation of Expression Vectors (pET32a and pET25b) in Expression of Polyepitopic Sequence Synthesized from Leishmania infantum Antigens انگل‌شناسی Parasitology پژوهشي Original <div style="text-align: justify;">زمینه: امروزه از روش‌های مولکولی در تشخیص بیماری‌ها، تولید واکسن‌ها، داروها و تولید پروتئین‌های نوترکیب استفاده می‌شود، لذا یکی از مراحل مهم انتخاب وکتور مناسب برای کلون و بیان ژن‌های هدف است. از آنجا که بیان پلی‌ژن‌های سنتتیک یا اصطلاحاً آنتی‌ژن‌های کایمریک با وزن مولکولی بالا نیاز به شرایط ویژه‌ای دارد، مطالعۀ حاضر به هدف ارزیابی میزان اهمیت نوع وکتور برای بیان اینگونه آنتی‌ژن‌ها انجام شد. مواد و روش‌ها: توالی 1250 جفت بازی متشکل از اپی‌توپ‌های هشت آنتی ژن مهم انگل لیشمانیا اینفانتوم طراحی و توسط شرکت بیوماتیک (کانادا) سنتز شد، توالی به‌صورت جداگانه درون دو وکتور بیانی pET25b و pET32a کلون و سپس به باکتری (DE3) E.coli BL21ترانسفورم و تحت شرایط مشابه بیان شدند. لیزابه باکتری توسط SDS PAGE بررسی و با وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت. یافته‌ها: نتایج SDS PAGE و وسترن بلات نشان داد که تولید پروتئین نوترکیب کامل و بی‌نقص توسط وکتور pET25b موفقیت‌آمیز نبوده است. این در حالی بود که پروتئین نوترکیب حاصل از بیان توالی پلی‌اپی‌توپی مذکور در وکتور pET32a به‌صورت موفقیت‌آمیزی تولید و تأئید گردید. نتیجه‌گیری: با توجه به بیان موفقیت‌آمیز توالی پلی‌اپی‌توپی درون وکتور pET32a و شناسایی و تأئید پروتئین مربوطه، از طرفی عدم موفقیت حصول پروتئین در وکتورpET25b  نشان داد که در مورد بیان برخی توالی‌های موزائیکی خاص کم بودن ویژگی حلالیت ممکن است به‌طور کلی دستیابی به پروتئین را با مشکل مواجه کند بنابراین انتخاب نوع وکتور بیانی باید با دقت بیشتری صورت گیرد. </div> <div style="text-align: justify;">Background: Molecular methods are nowadays used to diagnose diseases, produce vaccines, drugs and recombinant proteins. Therefore, one of the important steps in these procedures is selecting the appropriate vector for cloning and expression of the target genes. Because the expression of synthetic polygenes or so-called chimeric antigens with high molecular weight requires special conditions, the aim of this study was to evaluate the importance of vector type for expression of such antigens. Materials and Methods: The 1250bp sequence consisting of epitopes from eight important antigens of Leishmania infantum parasite was designed and synthesized by Biomatic Company (Cambridge, Canada). The sequence was cloned separately in two expression vectors pET25b and pET32a and then transformed into E.coli BL21 (DE3) and expressed under similar appropriate conditions. Bacterial lysates were analyzed by SDS PAGE and evaluated by Western blotting. Results: of SDS- PAGE and Western blot analysis showed that intact recombinant protein production by pET25b vector was not successful. However, the recombinant protein resulted from the expression of the aforementioned poly-epitope in pET32a vector was successfully produced and confirmed.   Conclusion: According to the successful expression confirmation of the poly-epitopic sequence within the pET32a vector and furthermore the failure to obtain protein in the pET25b vector showed that in the case of some specific mosaic sequences expression, protein isolation will be difficult because of low solubility. So, the expression vector choose should be made more carefully.  </div> توالی پلی‌اپی‌توپی, لیشمانیا اینفانتوم, سطح بیان, وکتور pET32a, وکتور pET25b Poly-epitopic structure, Leishmania infantum, Expression level, pET25b vector, pET32a vector 143 152 http://ismj.bpums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-296-21&slc_lang=fa&sid=1 Marzeah Taherzadeh مرضیه طاهرزاده 5700319475328460012176 5700319475328460012176 No Department of microbiology, School of Agriculture and Basic Sciences, Shiraz Branch, Islamic Azad University, Shiraz, Iran گروه میکروبیولوژی، دانشکده کشاورزی و علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی واحد شیراز، شیراز، ایران MoradAli Fouladvand مرادعلی فولادوند mfooladvand39@yahoo.com 5700319475328460012177 5700319475328460012177 Yes The Persian Gulf Marine Biotechnology Research Center, The Persian Gulf Biomedical Sciences Research Institute, Bushehr University of Medical Sciences, Bushehr, Iran مرکز تحقیقات زیست فناوری دریایی خلیج‌فارس، پژوهشکده علوم زیست پزشکی خلیج‌فارس، دانشگاه علوم پزشکی بوشهر، بوشهر، ایران Bahram Kazemi بهرام کاظمی 5700319475328460012178 5700319475328460012178 No Cellular and Molecular Biology Research Center, School of Medicine, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات بیولوژی سلولی و مولکولی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، تهران، ایران3