fa طراحی، تولید و ارزیابی وایروزوم از ویروس آنفلوانزا ساب تایپ H1N1 میکروب‌شناسی و ایمنولوژی Microbiology and Immunology پژوهشي Original <div style="text-align: justify;"><strong><u><span style="font-family:B Lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">زمینه:</span></span></u></strong> <strong><span style="font-family:B Lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">در دو دهه گذشته، اولین نسل از وایروزوم‌های آنفلوانزا گسترش پیدا کرد. وایروزوم‌های آنفلوانزا به‌دلیل کاربرد آن‌ها در زمینه‌های مختلف پزشکی به‌عنوان ابزاری نوین در برنامه‌های ساخت واکسن و ایمونوتراپی به حساب می‌آیند. هدف از مطالعه حاضر، ساخت وایروزوم کاتیونیک مشتق شده از ویروس آنفلوانزا با استفاده از دترجنت با قابلیت دیالیز (</span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">DCPC</span></span></strong><strong><span style="font-family:B Lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">) و لیپید کاتیونیک (</span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">DOTAP</span></span></strong><strong><span style="font-family:B Lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">) در شرایط آزمایشگاهی می&shy;باشد.</span></span></strong><br> <strong><u><span style="font-family:B Lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">مواد و روش‌ها</span></span></u></strong><strong><span style="font-family:B Lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">: ویروس آنفلوانزا سویه (</span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">H1N1</span></span></strong><strong><span style="font-family:B Lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">)</span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">A/Puerto Rico/8/34</span></span></strong> <strong><span style="font-family:B Lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">در رده سلولی اپیتلیال کلیه سگ سانان تکثیر داده شد. پوشش ویروس آنفلوانزا با استفاده از </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">DCPC</span></span></strong><strong><span style="font-family:B Lotus;"><span style="font-size:10.0pt;"> به‌عنوان یک دترجنت حل گردید و با استفاده از دیالیز، این دترجنت حذف شده و با افزودن لیپید کاتیونیک </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">DOTAP</span></span><span style="font-family:B Lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">، وایروزوم کاتیونیک سنتز شد. میزان سمیت سلولی وایروزوم سنتز شده با روش </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">MTT</span></span></strong><strong><span style="font-family:B Lotus;"><span style="font-size:10.0pt;"> مورد ارزیابی قرار گرفت و حضور پروتئین&shy;های هماگلوتنین و نورآمینیداز با استفاده </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">SDS-PAGE</span></span></strong><strong><span style="font-family:B Lotus;"><span style="font-size:10.0pt;"> مورد بررسی قرار گرفت. مورفولوژی وایروزوم ساخته شده از طریق میکروسکوپ عبوری بررسی شد.</span></span></strong><br> <strong><u><span style="font-family:B Lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">یافته‌ها</span></span></u></strong><strong><span style="font-family:B Lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">: غلظت نهایی وایروزوم ساخته شده، 5/1 میلی‌گرم در میلی‌لیتر بود. با استفاده از </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">SDS-PAGE</span></span></strong><strong><span style="font-family:B Lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">، حضور پروتئین&shy;های هماگلوتینین و نورآمینیداز تأیید شد. همچنین در مقایسه با گروه کنترل، سایتوتوکسیسیته پس از 48 ساعت از تیمار با غلظت‌های مختلف وایروزوم کاهش معنی‌داری داشت (05/0</span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">p</span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;"><</span></span></strong><strong><span style="font-family:B Lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">).</span></span></strong><br> <strong><u><span style="font-family:B Lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">نتیجه‌گیری</span></span></u></strong><strong><span style="font-family:B Lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">: استفاده از دترجنت </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">DCPC</span></span></strong><strong><span style="font-family:B Lotus;"><span style="font-size:10.0pt;"> و همچنین لیپید کاتیونیک </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">DOTAP</span></span></strong><strong><span style="font-family:B Lotus;"><span style="font-size:10.0pt;"> یک روش مؤثر در بازآرایی پوشش ویروس آنفلوانزا بدون ایجاد تغییرات در گلیکوپروتئین‌های سطحی ویروس می‌باشد. روش به کار رفته در تحقیق حاضر برای تولید وایروزوم، پتانسیل مناسبی در برنامه&shy;های طراحی واکسن آنفلوانزا در آینده خواهد داشت.</span></span></strong></div> <div style="text-align: justify;"><strong><u>Background:</u></strong> The last two decades witnessed the spread of the first generation of influenza viruses. Influenza virosomes are promising tools in vaccine and immunotherapy programs because of their applications in various medical fields. The aim of the present study was to construct cationic virosomes derived from<br> influenza virus using dialyzable detergent (DCPC) and cationic lipid (DOTAP) <em>in vitro</em>.<br> <strong><u>Materials and Methods:</u></strong> Influenza A / Puerto Rico / 34.8 (H1N1) strain was propagated in MDCK cell line. The influenza virus envelope was dissolved using DCPC as a dialyzable detergent, and finally it was removed by dialysis and the cationic virosome was synthesized through adding cationic lipid (DOTAP). Cytotoxicity and presence of HA and NA proteins were evaluated by cell viability assay (MTT assay) and sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), respectively. Also, macroscopic and morphology studies of virosomes were performed by transmission electron microscopy (TEM).<br> <strong><u>Results:</u></strong> The final concentration of virosomes was 1.5 mg/ml. The presence of HA and NA proteins was confirmed by SDS-PAGE. Cell survival was significantly decreased after 48 hours of treatment with<br> different concentrations of cationic virosomes (P<0.05).<br> <strong><u>Conclusion</u></strong>: The use of a detergent (DCPC) and also a cationic lipid (DOTAP) is an effective procedure for reconstruction of influenza virus envelope without any alteration in surface glycoproteins (HA, NA). The methoed used in the present study for producing influenza virosome will be a promising candidate for<br> developing influenza vaccines.</div> وایروزوم, ویروس آنفلوانزا, DCPC, لیپید کاتیونیک, کشت سلول Virosome, Influenza Virus, DCPC, Cationic lipid, Cell Culture 442 454 http://ismj.bpums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-118&slc_lang=fa&sid=1 Azadeh Alishahi آزاده علیشاهی 5700319475328460012527 5700319475328460012527 No Department of Microbiology, School of Basic Science, Qum Branch, Islamic Azad University, Qom, Iran گروه میکروب‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی قم، قم، ایران Mohsen Zargar محسن زرگر zargar@qom-iau.ac.ir 5700319475328460012528 5700319475328460012528 No Department of Microbiology, School of Basic Science, Qum Branch, Islamic Azad University, Qom, Iran گروه میکروب‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی قم، قم، ایران Amir Ghaemi امیر قائمی a_ghaem@pasteur.ac.ir 5700319475328460012529 5700319475328460012529 Yes Department of Influenza and other Respiratory Viruses, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش آنفلوانزا و ویروس‌های تنفسی شایع، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران Fatemeh Fotouhi فاطمه فتوحی 5700319475328460012530 5700319475328460012530 No Department of Influenza and other Respiratory Viruses, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش آنفلوانزا و ویروس‌های تنفسی شایع، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران Mohammad Reza Zolfaghari محمدرضا ذوالفقاری 5700319475328460012531 5700319475328460012531 No Department of Microbiology, School of Basic Science, Qum Branch, Islamic Azad University, Qom, Iran گروه میکروب‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی قم، قم، ایران