fa تأثیر توالی کوزاک در بیان موقت مینی‌ژنی از فاکتور 9 انعقادی در سلول‎های پستاندار عمومى General پژوهشي Original <p align="right">زمینه: قابلیت توالی کوزاک در افزایش بیان ژن های یوکاریوتی مشخص شده است. با توجه به این موضوع می توان از این توانمندی در جهت افزایش بیان پروتئین های نوترکیب استفاده کرد. مواد و روش‌ها: با هدف بالا بردن بیان ژن فاکتور IX انعقادی، سازه ای بیانی مجهز به پروموتر سایتومگالو ویروس انسانی (CMV) که بیان یک مینی ژن فاکتور IX را تحت کنترل داشت، به توالی کوزاک تجهیز شد. پس از تأیید صحت سازه نوترکیب، این سازه به همراه یک سازه بیان کننده فاکتور IX فاقد کوزاک (به عنوان کنترل مثبت) و یک پلاسمید pcDNA3 (به عنوان کنترل منفی) برای ترانسفکشن سلول های تخمدان هامستر چینی (CHO) در سه آزمایش مستقل مورد استفاده قرار گرفتند. محیط کشت سلول های ترانسفکت شده به منظور آشکارسازی بیان فاکتور IX انسانی پس از 2 و 3 روز جمع آوری و مورد آزمون یک مرحله ای انعقاد قرار گرفت. یافته‌ها: نتایج بدست آمده در مقایسه با کنترل منفی بیانگر بیان فاکتور IX فعال توسط دو گروه سلول های ترانسفکت شده با پلاسمید‎های نوترکیب بود. مقایسه ابتدایی میزان بیان دو گروه سلول های ترانسفکت شده با دو سازه نوترکیب، نشانگر افزایش بیان توسط سلول هایی است که حاوی توالی کوزاک هستند. نتیجه گیری: علاوه بر تأیید نقش افزاینده کوزاک بر بیان فاکتور IX، در این طرح با ساخت پلاسمیدهای بیانی ابزار مناسبی برای مطالعه سیستماتیک بیان فاکتور IX انسانی فعال فراهم شد. </p> Background: The positive effect of Kozak sequence on the translational efficiency of the eukaryotic genes has been noted and can be used in order to increase recombinant protein expression. Methods: A CMV-regulated human factor IX (hFIX) –expressing plasmid containing factor IX minigene– equipped with the Kozak sequence was constructed. After verification, the constructed plasmid which was in parallel with a Kozak-less hFIX-minigene expressing plasmid (the positive control) and a parental plasmid (pcDNA3) as the negative control were used to transfect Chinese Hamster Ovary (CHO) cells, separately. The expression of the recombinant hFIX (rhFIX) was evaluated by performing one-stage coagulation test on the cultured media collected from the transfected cells after 2 and 3 days. Results: This study indicated the expression of biologically active hFIX by cells transfected with either of the recombinant plasmids in comparison with negative control. The data also shows a higher coagulation activity in the cultured media taken from the cells transfected with the Kozak: hFIX-minigene compared to that of the cells transfected with the Kozak-less hFIX-minigene. Conclusion: In addition to confirming the positive effect of Kozak sequence on the translational efficiency of the eukaryotic genes, the constructed plasmids provide new tools for systematic analysis of the ability of the transfected cells for the production of biologically active hFIX. توالی کوزاک، ژن‌های یوکاریوتی، پروتئین نوترکیب، فاکتور IX Kozak sequence, eukaryotic genes expression, recombinant protein, factor IX 98 107 http://ismj.bpums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3-136&slc_lang=fa&sid=1 Aliakbar Hadad Mashhadrizeh علی اکبر حداد مشهدریزه 57003194753284600645 57003194753284600645 No Mohamad reza Saam محمدرضا سام 57003194753284600646 57003194753284600646 No Sedigheh Safary صدیقه صفری 57003194753284600647 57003194753284600647 No Alireza Zomorodi pour علیرضا زمردی پور zomorodi@nigeb.ac.ir 57003194753284600648 57003194753284600648 Yes Seyed Javad Hosseini سید جواد حسینی 57003194753284600649 57003194753284600649 No farzaneh Sabooni فرزانه صابونی 57003194753284600650 57003194753284600650 No