fa تولید ایمونوگلوبولین زرده تخم‌ مرغ (IgY) علیه پروتئین نوترکیب TolC از باکتری شیگلا فلکسنری بیوشیمی Biochemistry. Cell Biology and Genetics پژوهشي Original <div style="text-align: justify;"><span style="font-size:12pt"><span style="line-height:115%"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span lang="FA" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#1f4e79">زمینه: </span></span></span></span></b><span lang="FA" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">پیشرفت مقاومت آنتی‌بیوتیکی یک عامل نگران کننده جهانی برای مقابله با شیگلوزیس می‌باشد. توسعه افلاکس پمپ‌ها از جمله پمپ </span></span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">AcrAB&minus;TolC</span></span></span></span><span style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d"> موجب گسترش مقاومت آنتی‌بیوتیک در سویه‌های <i>شیگلا فلکسنری</i> شده است. هدف از این تحقیق تولید </span></span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">IgY</span></span></span></span><span lang="FA" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d"> علیه ایمونوژن نوترکیب </span></span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">TolC</span></span></span></span><span lang="FA" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d"> و ارزیابی میزان اتصال آن به ایمونوژن نوترکیب بود.</span></span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#1f4e79"></span></span></span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:12pt"><span style="line-height:115%"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span lang="FA" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#1f4e79">مواد و روش‌ها</span></span></span></span></b><span lang="FA" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">: پس از طراحی و سنتز سازه حاوی نواحی ایمونوژن پروتئین </span></span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">TolC</span></span></span></span><span lang="FA" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">، پلاسمید نوترکیب </span></span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">pET28a-tolC</span></span></span></span><span style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d"> به سلول‌های مستعد (</span></span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">DE3</span></span></span></span><span lang="FA" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">)</span></span></span></span><i><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">E. coli </span></span></span></span></i><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">BL21 </span></span></span></span><span lang="FA" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">&nbsp;ترانسفورم</span></span></span></span> <span lang="FA" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">شد. بیان پروتئین نوترکیب با غلظت 1 میلی‌مولار </span></span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">IPTG</span></span></span></span><span style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d"> القا گردید. پروتئین نوترکیب به روش کروماتوگرافی میل ترکیبی با استفاده از رزین (</span></span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">Ni-NTA</span></span></span></span><span lang="FA" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">) </span></span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">Nickel-Nitrilotriacetic acid</span></span></span></span><span style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d"> تخلیص و با وسترن بلاتینگ ارزیابی شد. ایمن‌سازی مرغ‌های نژاد لگهورن با 200 میکروگرم از پروتئین نوترکیب انجام شد. آنتی‌بادی</span></span></span></span> <span lang="FA" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">مرغی به روش ترسیب با پلی اتیلن گلیکول (</span></span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">PEG</span></span></span></span><span lang="FA" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">) استحصال و ارزیابی تیتر آنتی‌بادی</span></span></span></span> <span lang="FA" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">در سرم و زرده تخم مرغ، در مرغ‌های ایمن شده در مقایسه با گروه کنترل به روش الایزا تعیین گردید.</span></span></span></span><b><span lang="FA" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#1f4e79"></span></span></span></span></b></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:12pt"><span style="line-height:115%"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span lang="FA" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#1f4e79">یافته‌ها</span></span></span></span></b><span lang="FA" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">: پروتئین نوترکیب </span></span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">TolC</span></span></span></span><span lang="FA" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d"> با وزن مولکولی 40 کیلودالتون و بازده بیانی ۱۰ میلی‌گرم بر لیتر محیط کشت بیان شد. غلظت آنتی‌بادی مرغی تخلیص شده 9 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر از زرده تخم مرغ بود. نتایج تیتر آنتی‌بادی در سرم علیه پروتئین نوترکیب پس از تزریق سوم تا رقت 1 به 6400 معنی‌دار بود (0/05></span></span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">P</span></span></span></span><span lang="FA" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">). در روش الایزا حداقل 7 نانوگرم از آنتی‌بادی</span></span></span></span> <span lang="FA" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">به پروتئین نوترکیب واکنش نشان داد. </span></span></span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:12pt"><span style="line-height:115%"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span lang="FA" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#1f4e79">نتیجه‌گیری:</span></span></span></span></b><span lang="FA" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d"> آنتی‌بادی‌های حاصل از ایمونوژن نوترکیب </span></span></span></span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d">TolC</span></span></span></span><span lang="FA" style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#0d0d0d"> می‌توانند به عنوان منبع ایمنی غیرفعال در بیماری ایجاد شده توسط <i>شیگلا فلکسنری</i> مورد بررسی قرار گیرند. </span></span></span></span></span></span></span></span></span></div> <div style="text-align: justify;"><br> <div></div></div> <div style="text-align: justify;"><span style="font-size:12pt"><span style="line-height:115%"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span style="font-size:9.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#002060">Background:</span></span></span></span></b> <span style="font-size:9.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#404040">Growing antibiotic resistance is a global concern for the treatment of shigellosis. The development of efflux pumps such as the AcrAB-TolC pump has increased antibiotic resistance in <i>Shigella flexneri</i> strains. The aim of this study was to produce IgY against the recombinant immunogen TolC and evaluate the binding of the antibody to the recombinant immunogen</span></span></span></span><span style="font-size:10.0pt"><span style="background:white"><span style="line-height:115%"></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:12pt"><span style="line-height:115%"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span style="font-size:9.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#002060">Materials and Methods:</span></span></span></span></b> <span style="font-size:9.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#404040">A construct containing immunogen regions of TolC protein was designed and synthesized; then, the recombinant plasmid pET28a-tolC was transferred to <i>E. coli </i>BL21 (DE3) competent cells. Expression of the recombinant protein in <i>E. coli</i> was induced with 1 mM IPTG. The recombinant protein was purified using affinity chromatography by Nickel-Nitrilotriacetic acid (Ni-NTA) resin and evaluated by western blotting. Leghorn chickens were immunized with 200 micrograms of the recombinant protein. IgY was purified using PEG precipitation, and the antibody titer was determined in immunized chicken&rsquo;s serum and egg yolk by ELISA method compared to the control group. </span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:12pt"><span style="line-height:115%"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span style="font-size:9.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#002060">Results:</span></span></span></span></b> <span style="font-size:9.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#404040">Recombinant protein TolC was expressed with a molecular weight of 40 kDa and an expression yield of 10 mg/l of the culture media. The IgY concentration was determined to be 9 mg/ml of egg yolk. The antibody titer in serum against the recombinant protein after the third immunization was 1: 6400 (P<0.05). In the ELISA method, at least seven nanograms of antibody reacted with the recombinant protein.</span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:12pt"><span style="line-height:115%"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span style="font-size:9.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#002060">Conclusion: </span></span></span></span></b><span style="font-size:9.0pt"><span style="line-height:115%"><span iransans="" style="font-family:"><span style="color:#404040">Antibodies against TolC recombinant immunogen can be investigated as a source of passive immunity in the disease caused by Shigella flexneri.</span></span></span></span></span></span></span></div> شیگلا فلکسنری, افلاکس پمپ, TolC , پروتئین نوترکیب, IgY Shigella flexneri, Efflux pump, TolC, Recombinant protein, IgY 123 137 http://ismj.bpums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1115-17&slc_lang=fa&sid=1 Hossein Samiei-Abianeh حسین سمیعی ابیانه 5700319475328460018689 5700319475328460018689 No Department of Medical Biotechnology and Nanotechnology, School of Medicine، Mashhad University of Medical Sciences Mashhad, Iran <br>Department of Biology, School of Basic Sciences, Imam Hossein University, Tehran, Iran گروه زیست فناوری و نانو فناوری پزشکی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی مشهد، مشهد، ایران<br>گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران Shahram Nazarian شهرام نظریان nazarian@ihu. ac.ir 5700319475328460018690 5700319475328460018690 Yes Department of Biology, School of Basic Sciences, Imam Hossein University, Tehran, Iran گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران Amir Resaei امیر رضایی 5700319475328460018691 5700319475328460018691 No Department of Biology, School of Basic Sciences, Imam Hossein University, Tehran, Iran گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران Nahal Hadi نهال هادی 5700319475328460018692 5700319475328460018692 No Department of Bacteriology and Virology, School of Medicine, Shiraz University of Medical Sciences, Shiraz, Iran گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران Kosar Kayvan shokooh کوثر کیوان شکوه 5700319475328460018693 5700319475328460018693 No Department of Microbiology, School of Advanced Science and Technology, Tehran Medical Science, Islamic Azad University, Tehran, Iran گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم و فناوری‌های نوین، دانشگاه علوم پزشکی آزاد اسلامی تهران، تهران، ایران