fa کلونینگ ژن fimH اشریشیاکلی یوروپاتوژن و بررسی تنوع توالی آن عمومى General پژوهشي Original <p>زمینه: اشریشیا کلی یوروپاتوژن، شایع‌ترین پاتوژن جدا شده از مجاری ادراری محسوب می‌شود، که اغلب از فلور روده‌ای خود فرد منشأ می‌گیرد. عفونت مجاری ادراری، یکی از بیماری‌های شایع عفونی در انسان است. از آنجایی‌که، مرحله اتصال در کلونیزاسیون باکتری نقش مهمی دارد و سپس عفونت ایجاد می‌گردد، یکی از راه‌کارهای مهم مهار عفونت، مهار اتصال باکتری می‌باشد. به دلیل اینکه، پروتئین fimH به&lrm;عنوان ادهسین عمل می‌نماید، برای تهیه واکسن کاندیدی مناسب می‌باشد. مواد و روش‌ها: ابتدا استخراج DNA ژنومیک باکتری اشریشیا کلی سویهATCC ٣٥٢١٨ انجام شد. پس از طراحی پرایمر برای ژن fimH، واکنش PCR، ابتدا با آنزیم Taq DNA Polymerase و سپس با آنزیمpfu DNA Polymerase صورت گرفت. از پلاسمید (SK-)pBluescript ، برای کلون محصول PCR استفاده شد. با استفاده از نرم‌افزار ClustalW و MEGA4 توالی به‌دست آمده با توالی ژنی موجود با تک ژن همترازگردید و تنوع ژنی آن بررسی گردید. یافته‌ها: پس از توالی یابی ژن fimH کلون شده، با استفاده از نرم‌افزار ClustalW و MEGA4 نتیجه این سکانس با توالی سویه&lrm;های اشریشیا کلی واجد ژن fimH موجود در بانک ژن همتراز شدند و بر اساس این همترازی، ناحیه N ترمینال در سطح پروتئین و DNA حفاظت شده می‌باشد. نتیجه‌گیری: ناحیه‌ی N ترمینال ژن fimH در بین سویه‌های بالینی یک توالی حفاظت شده است و می‌توان از آن برای طراحی واکسن علیه عفونت ادراری استفاده نمود.</p> <p>Background: Escherichia coli uropathogen is the most prevalent pathogen separated from urinary tract that often is originated from intestinal flora of the own person. Urinary tract infection is one of the most prevalent infectious diseases in Human. Whereas binding stage has an important role in bacteria colonization and then the infection is created, one of the most important strategies for inhibiting the infection is inhibiting the bacterial binding. As fimH protein is acting as adhesion it could be an appropriate candidate for producingvaccine. Material and Methods: First, genomic DNA of Escherichia coli bacteria extracted from strain 35218 ATCC. Upon designing primer for fimH gene, the PCR reaction has been applied with Taq DNA Polymerase and then pfu DNA polymerase enzymes. pBluescript (SK-) plasmid has been applied for cloning the product of PCR. Using ClustalW and MEGA4 software, the subsequence was alignmented with the gene subsequence existing in gene bank and its gene diversity was examined. Results: After sequencing the cloned fimH gene using ClustalW and MEGA4 software, the result of this subsequence were alignmented with the subsequence of Escherichia coli containing fimH gene existing in gene bank and based on this alignment, N terminal on the protein surface and DNA are protected. Conclusion: N terminal domain of fimH gene is a conserved sequence among clinical isolates and it could be used for designing a vaccine against urinary tract infection.</p> اشریشیا کلی یوروپاتوژن, پیلی‌تیپ I, ژن fimH, کلونینگ Escherichia coli uropathogens, type I pili, fimH gene, cloning 189 197 http://ismj.bpums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3-359&slc_lang=fa&sid=1 Samaneh Ostad Mohammadi سمانه استادمحمدی 570031947532846006293 570031947532846006293 No Mohammad Hasan Shirazi محمد حسن شیرازی mhshirazi@tums.ac.ir 570031947532846006294 570031947532846006294 Yes Jalil Fallah Mehrabadi جلیل فلاح‌مهرآبادی 570031947532846006295 570031947532846006295 No Mohammad Reza Pourmand محمدرضا پورمند 570031947532846006296 570031947532846006296 No Faezeh Hamidieh فائزه حمیدیه 570031947532846006297 570031947532846006297 No Hedroosha Molla Agha Mirzaie هدروشا ملاآقامیرزایی 570031947532846006298 570031947532846006298 No Davood Afshar داود افشار 570031947532846006299 570031947532846006299 No