fa شناسایی مولکولی لپتوسپیراهای بیماری‌زا به‌روش واکنش زنجیره پلیمراز بر مبنای ژن ligB عمومى General پژوهشي Original <p>زمینه: لپتوسپیروز بیماری عفونی می‌باشد که به‌عنوان مهم‌ترین بیماری زئونوز شایع در جهان مطرح شده است. LigBیکی از مهم‌ترین پروتئین‌های غشاء خارجی لپتوسپیرا می‌باشد، ایمونوژن می‌باشد و تنها در لپتوسپیراهای بیماری‌زا وجود دارد. هدف این پژوهش تشخیص مولکولی لپتوسپیراهای بیماری‌زا به‌روش PCR بر مبنای ژن ligB می‌باشد. مواد و روش‌ها: در این بررسی از پنج سرووار بیماری‌زای لپتوسپیرا و یک سرووار غیر بیماری‌زا استفاده گردید. باکتری‌ها در محیط کشت اختصاصی کشت داده شدند و DNA ژنومیک آن‌ها تخلیص گردید. پرایمرهای اختصاصی جهت تکثیر ژنligB طراحی و حساسیت و ویژگی آن در PCR بررسی شد. یافته‌ها: با توجه به داده‌های PCR مشخص شد که این ژن فقط در سرووارهای گونه بیماری‌زا حضور دارد و قطعه bp 1041 حاصل که نشان‌دهنده تکثیر ژن ligBمی‌باشد، در گونه غیربیماری‌زای بایفلکسا مشاهده نگردید. نتیجه‌گیری: بیماری لپتوسپیروز در مناطق معتدل و مرطوب که دارای بارندگی زیاد بوده دارای شیوع بیشتری است و به‌علت کند رشد بودن این باکتری، جداسازی آن از نمونه‌های بالینی به‌روش کشت بسیار مشکل و زمان‌بر است. بنابراین یک آزمایش تشخیصی مولکولی مناسب با ویژگی و حساسیت بالا مانند PCRبرای تشخیص درست، به‌موقع و سریع این بیماری دارای اهمیت می‌باشد.</p> <p>Background: Leptospirosis is an emerging infectious disease and is considered to be the most widespread zoonotic disease in the world. LigB is an immunogenic outer membrane protein. The leptospiral ligB gene expressed only in pathogenic Leptospira spp. The aim of this study was molecular diagnosis of pathogen Leptospires by PCR based on ligB gene. Materials and Methods: Five pathogenic Leptospires: L. canicola, L. grippotyphosa, L. pomona, L. icterohaemorrhagiae, L. serjoe hardjo and saprophytic L. biflexa were used in this study. The bacteria were inoculated into the selective culture medium and extraction of the genomic DNA was performed by standard Phenol-Chlorophorm method. The specific primers for proliferation of ligB gene were designed. The specificity and sensitivity of PCR method was evaluated. Results: PCR product was 1041bp which indicated proliferation of ligB gene which was supported using electrophoresis. The PCR based on ligB gene detected all pathogenic reference serovars of Leptospira spp. tested. No PCR products were amplified from the non-pathogenic L. biflexa. Conclusion: Considering the spread of Leptosperosis in moderate and hot areas which have high rate of fall, a proper molecular diagnostic test with high specificity and sensitivity such as PCR is essential. PCR assay with high specificity and sensitivity may prove to be a rapid method for diagnosing acute leptospirosis. The results suggested that the PCR based on ligB gene can be used for detection of pathogenic leptospires.</p> لپتوسپیروزیس, لپتوسپیرا انتروگانس, PCR, ژن ligB Leptospirosis, Leptospira interrogans, PCR, ligB 550 559 http://ismj.bpums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3-487&slc_lang=fa&sid=1 Fariba Fotohi فریبا فتوحی 570031947532846008805 570031947532846008805 No Department of Microbiology, School of Sciences, Islamic Azad University, Karaj Branch, Karaj, IRAN گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد کرج، ایران Mehrangiz Dezhbord مهرانگیز دژبرد 570031947532846008806 570031947532846008806 No Department of Microbiology, Razi Vaccine & Serum Research Institute, Karaj, IRAN بخش میکروب‌شناسی، مؤسسه تحقیقاتی واکسن و سرم سازی رازی، کرج، ایران Pzhvak Khaki پژواک خاکی p.khaki@rvsri.ir 570031947532846008807 570031947532846008807 Yes Department of Microbiology, School of Sciences, Islamic Azad University, Karaj Branch, Karaj, IRAN<br>Department of Microbiology, Razi Vaccine & Serum Research Institute, Karaj, IRAN گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد کرج، ایران<br>خش میکروب‌شناسی، مؤسسه تحقیقاتی واکسن و سرم سازی رازی، کرج، ایران Reza Pilehchian Langrodi رضا پیله‌چیان لنگرودی 570031947532846008808 570031947532846008808 No Department of Anaerobic, Razi Vaccine & Serum Research Institute, Karaj, IRAN بخش بی‌هوازی، مؤسسه تحقیقاتی واکسن و سرم سازی رازی، کرج، ایران Behzad Salehi بهزاد صالحی 570031947532846008809 570031947532846008809 No Department of Microbiology, School of Sciences, Islamic Azad University, Karaj Branch, Karaj, IRAN گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد کرج، ایران Sohela Moradi Bidhendi سهیلا مرادی بیدهندی 570031947532846008810 570031947532846008810 No Department of Microbiology, Razi Vaccine & Serum Research Institute, Karaj, IRAN بخش میکروب‌شناسی، مؤسسه تحقیقاتی واکسن و سرم سازی رازی، کرج، ایران