fa بررسی مقایسه‌ای روش‌های مولکولی PCR-RFLP، آلل اسپسیفیک PCR و سکوئنس جهت تشخیص سریع مقاومت به ایزونیازید در سویه‌های کلینیکی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس عمومى General پژوهشي Original <p>زمینه: ایزونیازید یکی از داروهای خط اول درمان سل می‌باشد که مقاومت به آن به‌صورت فزاینده‌ای گزارش می‌شود. در مطالعه حاضر دو روش مولکولی جهت تشخیص سریع مقاومت سویه‌های کلینیکی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس به ایزونیازید طراحی و با نتایج سکوئنس مورد مقایسه قرار گرفتند. مواد و روش‌ها: در این مطالعه 60 سویه کلینیکی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس، که با روش تعیین حساسیت دارویی (DST) مقاومت به ایزونیازید در آن‌ها اثبات شده، استفاده گردید. سه روش مولکولیSequencing ،PCR-RFLP و Allele Specific-PCR جهت تعیین موتاسیون در کدون 315 مرتبط با مقاومت به ژن katG مقایسه شدند. بدین منظور با کمک پرایمرهای اختصاصی که قادر به تشخیص موتاسیون در این کدون بودند، روش آلل اسپسفیک اجرا گردید. علاوه بر این، در روش PCR-RFLP از آنزیم HpaII جهت برش آنزیمی محصولPCR استفاده شد، عدم برش توسط آنزیم به‌عنوان رخداد موتاسیون در نظر گرفته شد. یافته‌ها: بدین‌منظور سویه‌های حساس، مقاوم به دارو و سویه استاندارد H37Rv مورد استفاده قرار گرفتند. از سویه‌های مورد مطالعه، تعداد 27 سویه مقاوم و 33 سویه حساس به ایزونیازید بودند. نتایج سکوئنس به‌عنوان استاندارد طلایی مشخص نمود که AS-PCR و PCR-RFLP به‌خوبی قادر به تشخیص موتاسیون در کدون 315 در سویه‌های مقاوم فنوتیپی با حساسیت و ویژگی به‌ترتیب 48/81 درصد و 100 درصد بودند. نتیجه‌گیری: نتایج مطالعه حاضر نشان می‌دهد که روش‌های PCR-RFLP و AS-PCR طراحی شده می‌توانند به‌عنوان روش‌های ساده و سریع برای تعیین حساسیت و مقاومت به ایزونیازید در سویه‌های مایکوباکتریوم توبرکلوزیس مورد استفاده قرارگیرند. پیشنهاد می‌شود جهت کاهش ریسک خطا، با توجه به ساده و کم هزینه بودن به‌صورت همزمان از هر دو تست برای تشخیص مقاومت به ایزونیازید استفاده شود.</p> <p>Background: Isoniazid is from the first-line drugs for treatment of tuberculosis. Resistance to Isoniazid is increasingly reported. In the study, molecular methods for rapid detection of isoniazid resistance in clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis were compared. Materials and Methods : Sixty clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis were selected and their resistance and susceptibility were determined by proportional method. Molecular methods of PCR-RFLP and Allele Specific-PCR (AS-PCR) for determination of probably mutation in codon 315 of katG gene that related to Isoniazid resistance were used and compared by sequencing results as gold standard. In AS-PCR specific primers by proper PCR conditions were used. RFLP analysis of the PCR products was performed using the enzyme HpaII. Results: From 60 studied strains, 27 isolates were resistant and 33 strains were susceptible to isoniazid. Sequencing results showed that AS-PCR and PCR-RFLP well able to detect mutations in codon 315 of the strains by 81.48% sensitivity and 100% specificity respectively. None of the susceptible strains harbored mutation in katG315. Conclusion: Our results indicated that PCR-RFLP and AS - PCR methods were simple and fast methods for determination of isoniazid resistance in Mycobacterium tuberculosis. These rapid and low cost methods is recommended simultaneously to reduce the risk of error in routine work.</p> ایزونیازید, مایکوباکتریوم توبرکلوزیس, PCR-RFLP, Allele Specific-PCR Isoniazid, Mycobacterium tuberculosis, PCR-RFLP, Allele Specific-PCR 296 303 http://ismj.bpums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3-586&slc_lang=fa&sid=1 Hamid Bornasi حمید برناسی 570031947532846008529 570031947532846008529 No Department of Immunology and Microbiology, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran گروه میکروب‌شناسی و ایمنی‌شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اراک Mohammad Arjomandzadegan محمد ارجمندزادگان arjomandzadegan@arakmu.ac.ir 570031947532846008530 570031947532846008530 Yes Department of Immunology and Microbiology, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran<br>Tuberculosis and Pediatric Infectious Diseases Research Center, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran گروه میکروب‌شناسی و ایمنی‌شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اراک<br>مرکز تحقیقات سل و عفونی کودکان، دانشگاه علوم پزشکی اراک Ahmadreza Bahrmand احمدرضا بهرمند 570031947532846008531 570031947532846008531 No Mycobacteriology Dept, Pasteur Institute of Iran, Tehran بخش سل و تحقیقات ریوی، انستیتو پاستور ایران، تهران Alireza Hadizadeh Tasbiti علیرضا هادی‌زاده تثبیتی 570031947532846008532 570031947532846008532 No Mycobacteriology Dept, Pasteur Institute of Iran, Tehran بخش سل و تحقیقات ریوی، انستیتو پاستور ایران، تهران Azam Ahmadi اعظم احمدی 570031947532846008533 570031947532846008533 No Tuberculosis and Pediatric Infectious Diseases Research Center, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran مرکز تحقیقات سل و عفونی کودکان، دانشگاه علوم پزشکی اراک Maryam Tayeboon مریم طیبون 570031947532846008534 570031947532846008534 No Tuberculosis and Pediatric Infectious Diseases Research Center, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran مرکز تحقیقات سل و عفونی کودکان، دانشگاه علوم پزشکی اراک