Iranian South Medical Journal
مجله طب جنوب
Iran South Med J
Medical Sciences
http://ismj.bpums.ac.ir
57
journal57
1735-4374
1735-6954
10.52547/ismj
fa
jalali
1394
10
1
gregorian
2016
1
1
18
6
online
1
fulltext
fa
تشخیص سریع موتاسیون در کدون 43 ژن rpsL مرتبط با مقاومت به استرپتومایسین توسط تکنیک RFLP با آنزیمهای اندونوکلئازی BsajI و MbooII در سویههای کلینیکی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس
Rapid detection of mutations in codon 43 of rpsL gene by RFLP method with BsajI and MbooII restriction enzymes associated with resistance to Streptomycin in clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis
میکروبشناسی و ایمنولوژی
Microbiology and Immunology
پژوهشي
Original
<p dir="RTL"><strong><u>زمینه</u></strong>: <strong>استرپتومایسین یکی از مهمترین داروهای مؤثر جهت درمان بیماری سل میباشد که مقاومت به آن به طور فزایندهای گزارش میشود. شایعترین موتاسیونهای مرتبط با مقاومت به داروی استرپتومایسین در مایکوباکتریوم توبرکلوزیس در کدونهای 43 و 88 &zwjژن </strong><strong><span dir="LTR">rpsL</span></strong> <strong>(</strong><strong><span dir="LTR">NC_000962.3</span></strong><strong>) اتفاق میافتد. هدف از این مطالعه بررسی تغییرات ژن </strong><strong><span dir="LTR">rpsL</span></strong><strong> در سویههای کلینیکی این باکتری با استفاده از دو آنزیم </strong><strong><span dir="LTR">BsajI</span></strong> <strong>و </strong><strong><span dir="LTR">MbooII</span></strong> <strong>است.</strong></p>
<p dir="RTL"><strong><u>مواد و روشها:</u></strong> <strong>در این مطالعه 71 سویه کلینیکی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس استفاده شد. روش مولکولی </strong><strong><span dir="LTR">PCR-RFLP</span></strong><strong> با دو آنزیم </strong><strong><span dir="LTR">BsajI</span></strong> <strong>و </strong><strong><span dir="LTR">MboII</span></strong> <strong>جهت تعیین موتاسیون در کدون 43 ژن </strong><strong><span dir="LTR">rpsL</span></strong><strong>، به ترتیب در سویههای مقاوم و حساس، طراحی و نتایج بهدست آمده با روش توالییابی و فنوتیپ سویهها مقایسه گردید.</strong></p>
<p dir="RTL"><strong><u>یافتهها</u></strong><strong>: در این مطالعه از کل سویههای موجود، 25 سویه توسط آنزیم </strong><strong><span dir="LTR">BsajI</span></strong> <strong>بررسی شدند که از این تعداد، ۶۴ درصد سویههای مقاوم تشخیص داده شد. <a name="OLE_LINK1">46 سویه نیز توسط آنزیم </a></strong><strong><span dir="LTR">MboII</span></strong> <strong>بررسی و حدود ۹۱ درصد سویههای حساس فاقد موتاسیون تشخیص داده شد.</strong><strong> این آنزیم (برخلاف </strong><strong><span dir="LTR">BsajI</span></strong><strong>) برای تشخیص سویههای حساس طراحی شده بود. نتایج توالییابی انطباق کامل با نتایج </strong><strong><span dir="LTR">PCR</span></strong><strong><span dir="LTR">-</span></strong><strong><span dir="LTR">RFLP</span></strong> <strong>را نشان داد و وجود جهش در کدونهای 43 این ژن را در سویههای مورد مطالعه اثبات نمود.</strong></p>
<p dir="RTL"><strong><u>نتیجهگیری:</u></strong><strong> نتایج مطالعه حاضر نشان میدهد که روش </strong><strong><span dir="LTR">RFLP</span></strong> <strong>با آنزیمهای اندونوکلئازی طراحی شده میتواند به عنوان روشی سریع، ساده و دارای حساسیت بالا برای تمایز سویههای مایکوباکتریوم توبرکلوزیس مقاوم و حساس به استرپتومایسین مورد استفاده قرار گیرد.</strong></p>
<p><strong><u>Background</u></strong>: Streptomycin is one of the most efficient treatments of tuberculosis <span dir="RTL">that</span> increasingly reported its drug resistance<span dir="RTL">.</span> The most common mutations associated with drug resistance to streptomycin of Mycobacterium Tuberculosis, causes tuberculosis<span dir="RTL">,</span> and occurs at codons 43 and 88<span dir="RTL"> of </span>rpsL gene. The purpose of this study is study of alterations in rpsL gene with two restriction enzymes BsajI and MbooII related to drug resistant to streptomycin in clinical isolates of mycobacterium tuberculosis.</p>
<p><strong><u>Materials and Methods:</u></strong> This study was performed using 71 clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis. Molecular PCR-RFLP methods were designed with two enzymes BsajI and MbooII for mutation analysis at codon 43 of rpsL, in resistant and susceptible strains, respectively. Finally, the results were compared with sequencing and phenotype strains.</p>
<p><strong><u>Results:</u></strong> 25 subjects were studied with enzyme BsajI. This enzyme is capable of detection 64 percent of resistant and all sensitive strains. 46 strains were examined by enzyme MboII. This enzyme detected almost 91 percent of sensitive strains. MboII is selected for detection of sensitive strains (unlike BsajI). Results of sequencing rpsL genes in investigated strains, showed fully consistent with the results of PCR-RFLP and proved mutation in codon of 43 of thin genes in studied strains.</p>
<p><strong><u>Conclusion:</u></strong> The results showed that the PCR-RFLP with designed restriction enzymes can be used as a rapid, simple assay, and has high sensitivity for differentiation of Mycobacterium tuberculosis strains that are resistance to Streptomycin.</p>
<p></p>
مقاومت دارویی, استرپتومایسین, PCR-RFLP, BsajI
Drug resistance, Streptomycin, PCR-RFLP, BsajI
1115
1123
http://ismj.bpums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3-652&slc_lang=fa&sid=1
Mohammad
Arjomandzadegan
محمد
ارجمندزادگان
570031947532846007069
570031947532846007069
No
Department of Microbiology and Immunology, Infectious Disease Research Center (IDRC), Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran
گروه میکروبیولوژی و ایمونولوژی، مرکز تحقیقات بیماریهای عفونی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران
Somaeah
Geravand
سمیه
گراوند
570031947532846007070
570031947532846007070
No
Department of Microbiology, Islamic Azad University, Tehran (Markazi), Iran
گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی علوم تحقیقات تهران (مرکزی)، ایران
Azam
Ahmadi
اعظم
احمدی
azam.ahmadi@modares.ac.ir
570031947532846007071
570031947532846007071
Yes
Department of molecular genetics, Tarbiat modares University, Infectious Disease Research Center (IDRC), Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran
گروه ژنتیک مولکولی، دانشگاه تربیت مدرس تهران، مرکز تحقیقات بیماریهای عفونی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران
Maryam
Sadrnia
مریم
صدرنیا
570031947532846007072
570031947532846007072
No
Department of Biology, Payame Noor University, Tehran, Iran
گروه زیستشناسی، دانشگاه پیام نور، تهران، ایران
Manezheh
Kahbazi
منیژه
کهبازی
570031947532846007073
570031947532846007073
No
Department of Pediatrics, Infectious Disease Research Center (IDRC), Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran
بخش اطفال، مرکز تحقیقات بیماریهای عفونی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران