fa تشخیص سریع موتاسیون در کدون 43 ژن rpsL مرتبط با مقاومت به استرپتومایسین توسط تکنیک RFLP با آنزیم‌های اندونوکلئازی BsajI و MbooII در سویه‌های کلینیکی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس میکروب‌شناسی و ایمنولوژی Microbiology and Immunology پژوهشي Original <p dir="RTL"><strong><u>زمینه</u></strong>: <strong>استرپتومایسین یکی از مهم‌ترین داروهای مؤثر جهت درمان بیماری سل می‌باشد که مقاومت به آن به طور فزاینده‌ای گزارش می‌شود. شایع‌ترین موتاسیون‌های مرتبط با مقاومت به داروی استرپتومایسین در مایکوباکتریوم توبرکلوزیس در کدون‌های 43 و 88 &zwjژن </strong><strong><span dir="LTR">rpsL</span></strong> <strong>(</strong><strong><span dir="LTR">NC_000962.3</span></strong><strong>) اتفاق می‌افتد. هدف از این مطالعه بررسی تغییرات ژن </strong><strong><span dir="LTR">rpsL</span></strong><strong> در سویه‌های کلینیکی این باکتری با استفاده از دو آنزیم </strong><strong><span dir="LTR">BsajI</span></strong> <strong>و </strong><strong><span dir="LTR">MbooII</span></strong> <strong>است.</strong></p> <p dir="RTL"><strong><u>مواد و روش‌ها:</u></strong> <strong>در این مطالعه 71 سویه کلینیکی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس استفاده شد. روش مولکولی </strong><strong><span dir="LTR">PCR-RFLP</span></strong><strong> با دو آنزیم </strong><strong><span dir="LTR">BsajI</span></strong> <strong>و </strong><strong><span dir="LTR">MboII</span></strong> <strong>جهت تعیین موتاسیون در کدون 43 ژن </strong><strong><span dir="LTR">rpsL</span></strong><strong>، به ترتیب در سویه‌های مقاوم و حساس، طراحی و نتایج به‌دست آمده با روش توالی‌یابی و فنوتیپ سویه‌ها مقایسه گردید.</strong></p> <p dir="RTL"><strong><u>یافته‌ها</u></strong><strong>: در این مطالعه از کل سویه‌های موجود، 25 سویه توسط آنزیم </strong><strong><span dir="LTR">BsajI</span></strong> <strong>بررسی شدند که از این تعداد، ۶۴ درصد سویه‌های مقاوم تشخیص داده شد. <a name="OLE_LINK1">46 سویه نیز توسط آنزیم </a></strong><strong><span dir="LTR">MboII</span></strong> <strong>بررسی و حدود ۹۱ درصد سویه‌های حساس فاقد موتاسیون تشخیص داده شد.</strong><strong> این آنزیم (برخلاف </strong><strong><span dir="LTR">BsajI</span></strong><strong>) برای تشخیص سویه‌های حساس طراحی شده بود. نتایج توالی‌یابی انطباق کامل با نتایج </strong><strong><span dir="LTR">PCR</span></strong><strong><span dir="LTR">-</span></strong><strong><span dir="LTR">RFLP</span></strong> <strong>را نشان داد و وجود جهش در کدون‌های 43 این ژن را در سویه‌های مورد مطالعه اثبات نمود.</strong></p> <p dir="RTL"><strong><u>نتیجه‌گیری:</u></strong><strong> نتایج مطالعه حاضر نشان می‌دهد که روش </strong><strong><span dir="LTR">RFLP</span></strong> <strong>با آنزیم‌های اندونوکلئازی طراحی شده می‌تواند به عنوان روشی سریع، ساده و دارای حساسیت بالا برای تمایز سویه‌های مایکوباکتریوم توبرکلوزیس مقاوم و حساس به استرپتومایسین مورد استفاده قرار گیرد.</strong></p> <p><strong><u>Background</u></strong>: Streptomycin is one of the most efficient treatments of tuberculosis <span dir="RTL">that</span> increasingly reported its drug resistance<span dir="RTL">.</span> The most common mutations associated with drug resistance to streptomycin of Mycobacterium Tuberculosis, causes tuberculosis<span dir="RTL">,</span> and occurs at codons 43 and 88<span dir="RTL"> of </span>rpsL gene. The purpose of this study is study of alterations in rpsL gene with two restriction enzymes BsajI and MbooII related to drug resistant to streptomycin in clinical isolates of mycobacterium tuberculosis.</p> <p><strong><u>Materials and Methods:</u></strong> This study was performed using 71 clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis. Molecular PCR-RFLP methods were designed with two enzymes BsajI and MbooII for mutation analysis at codon 43 of rpsL, in resistant and susceptible strains, respectively. Finally, the results were compared with sequencing and phenotype strains.</p> <p><strong><u>Results:</u></strong> 25 subjects were studied with enzyme BsajI. This enzyme is capable of detection 64 percent of resistant and all sensitive strains. 46 strains were examined by enzyme MboII. This enzyme detected almost 91 percent of sensitive strains. MboII is selected for detection of sensitive strains (unlike BsajI). Results of sequencing rpsL genes in investigated strains, showed fully consistent with the results of PCR-RFLP and proved mutation in codon of 43 of thin genes in studied strains.</p> <p><strong><u>Conclusion:</u></strong> The results showed that the PCR-RFLP with designed restriction enzymes can be used as a rapid, simple assay, and has high sensitivity for differentiation of Mycobacterium tuberculosis strains that are resistance to Streptomycin.</p> <p></p> مقاومت دارویی, استرپتومایسین, PCR-RFLP, BsajI Drug resistance, Streptomycin, PCR-RFLP, BsajI 1115 1123 http://ismj.bpums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3-652&slc_lang=fa&sid=1 Mohammad Arjomandzadegan محمد ارجمندزادگان 570031947532846007069 570031947532846007069 No Department of Microbiology and Immunology, Infectious Disease Research Center (IDRC), Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran گروه میکروبیولوژی و ایمونولوژی، مرکز تحقیقات بیماری‌های عفونی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران Somaeah Geravand سمیه گراوند 570031947532846007070 570031947532846007070 No Department of Microbiology, Islamic Azad University, Tehran (Markazi), Iran گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی علوم تحقیقات تهران (مرکزی)، ایران Azam Ahmadi اعظم احمدی azam.ahmadi@modares.ac.ir 570031947532846007071 570031947532846007071 Yes Department of molecular genetics, Tarbiat modares University, Infectious Disease Research Center (IDRC), Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran گروه ژنتیک مولکولی، دانشگاه تربیت مدرس تهران، مرکز تحقیقات بیماری‌های عفونی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران Maryam Sadrnia مریم صدرنیا 570031947532846007072 570031947532846007072 No Department of Biology, Payame Noor University, Tehran, Iran گروه زیست‌شناسی، دانشگاه پیام نور، تهران، ایران Manezheh Kahbazi منیژه کهبازی 570031947532846007073 570031947532846007073 No Department of Pediatrics, Infectious Disease Research Center (IDRC), Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran بخش اطفال، مرکز تحقیقات بیماری‌های عفونی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران