fa کلونینگ وتعیین توالی ژن کد کننده lipL21، در سرووارهای واکسینال لپتوسپیرا اینتروگانس میکروب‌شناسی و ایمنولوژی Microbiology and Immunology پژوهشي Original <div> <p dir="RTL"><strong><u>زمینه</u></strong><strong>: لپتوسپیروزیس نوعی بیماری مشترک بین انسان و دام است، که توسط باکتری لپتوسپیزا اینتروگانس ایجاد می‌شود. ژن بیان کننده </strong><strong><span dir="LTR">LipL21</span></strong><strong> یکی از ژن‌های شناسایی شده در باکتری لپتوسپیرا است که فقط در سویه‌های بیماری‌زا وجود دارد. هدف از این تحقیق کلونینگ و آنالیز تعیین توالی ژن کد کننده لیپوپروتئین سطحی </strong><strong><span dir="LTR">LipL21</span></strong> <strong>در 5 سرووار واکسینال باکتری لپتوسپیرا اینتروگانس در ایران می‌باشد</strong><strong><span dir="LTR">.</span></strong></p> <p dir="RTL"><strong><u>مواد و روش‌ها</u></strong><strong><span dir="LTR">:</span></strong><strong> سرووارهای بیماری‌زای لپتوسپیرا اینتروگانس در محیط کشت اختصاصی</strong><strong><span dir="LTR">EMJH</span></strong> <strong>&nbsp;و 10 درصد سرم خرگوش کشت داده شدند. بعد از استخراج </strong><strong><span dir="LTR">DNA</span></strong> <strong>ژنومیک با استفاده از پرایمرهای اختصاصی </strong><strong><span dir="LTR">PCR</span></strong> <strong>گذاشته شد و محصول </strong><strong><span dir="LTR">PCR</span></strong> <strong>در درون وکتور </strong><strong><span dir="LTR">E.Coli DH5&alpha</span></strong><strong> انتقال داده شد. پلاسمیدهای نوترکیب جهت تعیین توالی ارسال گردید</strong><strong><span dir="LTR">.</span></strong></p> <p dir="RTL"><strong><u>یافته‌ها</u></strong><strong>: آنالیز توالی ژن </strong><strong><span dir="LTR">lipL21</span></strong> <strong>در مورد سرووارهای واکسینال داخلی و مقایسه آن‌ها با دیگر سرووارهای موجود در بانک ژنی نشان داد که 3 سرووار واکسینال سرجوهاردجو، کانی کولا و پومونا دارای 100 درصد تشابه با همدیگر می‌باشند و سرووار گریپوتیفوزا دارای بیشترین اختلاف با سرووارهای واکسینال می‌باشد. در کل نتایج نشان داد که این ژن یک ژن بسیار حفاظت شده در سرووارهای واکسینال بومی و سرووارهای موجود در بانک ژنی با درصد تشابه بالای 7/95 درصد می‌باشد</strong><strong><span dir="LTR">.</span></strong></p> <p dir="RTL"><strong><u>نتیجه‌گیری:</u></strong> <strong>نتایج نشان داد که ژن </strong><strong><span dir="LTR">lipL21</span></strong> <strong>در میان سرووارهای واکسینال بسیار حفاظت شده (4/96 درصد< شباهت) می‌باشد. بنابراین ژن کد کننده پروتئین سطحی </strong><strong><span dir="LTR">LipL21</span></strong> <strong>می‌تواند به‌عنوان یک تست سرولوژیک مناسب با ویژگی و حساسیت بالا برای تشخیص درست و به موقع لپتوسپیروزیس در نمونه‌های کلینیکی و هم در آینده به عنوان کاندیدایی برای واکسن‌های زیرواحد مؤثر مورد استفاده قرار گیرد</strong><strong><span dir="LTR">.</span></strong></p> </div> <p style="margin-right:2.85pt"></p> <p><strong><u>Background</u></strong>: Leptospirosis is a zoonotic disease in humans and animals, caused by the bacterium <em>Leptospira</em> <em>interrogans</em>. Gene expressing LipL21 is one of the genes identified in the bacterium, existing only in the pathogenic strains. The aim of this study was to cloning and analyzing the sequence of the gene encoding surface lipoprotein, LipL21, in five vaccinal <em>leptospira</em> serovars in Iran<span dir="RTL">.</span></p> <p><strong><u>Material and Methods</u></strong>: Pathogenic <em>Leptospira</em> <em>interrogans</em> serovars were cultured in EMJH medium with 10% rabbit serum. After genomic DNA extraction, PCR with specific primers was employed and the resulting product inserted in a vector then transferred into E. Coli DH5&alpha. The recombinant plasmids were finally sent for sequencing<span dir="RTL">.</span></p> <p><strong><u>Results</u></strong>: The analysis of gene lipL21 in domestic vaccinal serovars and comparison of them with other serovars in the GenBank database revealed that three vaccinal serovars serjo hardjo, canicola and pomona had 100% similarity with each other and grippotyphosa serovar had the highest difference with the vaccinal serovars. In general, the results showed that this gene is a highly conserved gene in the domestic vaccinal serovars and serovars in the GenBank database with more than 95.7 percent similarity<span dir="RTL">.</span></p> <p><strong><u>Conclusion</u></strong>: These results showed that the gene, lipL21, is highly conserved in the vaccinal serovars (similarities > 96.4 %). Therefore, the gene encoding surface protein LipL21 can serve as a useful serologic test with high specificity and sensitivity for diagnosis of leptospirosis in clinical samples and in future as an effective subunit vaccine candidate to be used.</p> <p></p> لپتوسپیروزیس, لپتوسپیرا, ژن lipL21, کلونینگ Leptospirosis, Leptospira Spp., lipL21 gene, cloning 1140 1148 http://ismj.bpums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3-655&slc_lang=fa&sid=1 Rasoul Hoseinpur رسول حسین‌پور 570031947532846007081 570031947532846007081 No Leptospira Reference laboratory, Department of Microbiology, Razi Vaccine Research Institute, Karaj, Iran بخش میکروب‌شناسی، مؤسسه تحقیقاتی واکسن و سرم سازی رازی، کرج، ایران Pezhvak Khaki پژواک خاکی P.Khaki@rvsri.ac.ir 570031947532846007082 570031947532846007082 Yes Leptospira Reference laboratory, Department of Microbiology, Razi Vaccine Research Institute, Karaj, Iran بخش میکروب‌شناسی، مؤسسه تحقیقاتی واکسن و سرم سازی رازی، کرج، ایران Soheila Moradi Bidhendi سهیلا مرادی بیدهندی 570031947532846007083 570031947532846007083 No Leptospira Reference laboratory, Department of Microbiology, Razi Vaccine Research Institute, Karaj, Iran بخش میکروب‌شناسی، مؤسسه تحقیقاتی واکسن و سرم سازی رازی، کرج، ایران Mojtaba Noofeli مجتبی نوفلی 570031947532846007084 570031947532846007084 No Human Bacterial Vaccines Research and Production Department, Razi Vaccine Research Institute, Karaj, Iran بخش واکسن‌های پزشکی، مؤسسه تحقیقاتی واکسن و سرم سازی رازی، کرج، ایران