fa ارزیابی رخداد احتمالی موتاسیون در ژن‌های سیستم ترمیم MMR در سویه‌های کلینیکی مقاوم و حساس مایکوباکتریوم توبرکلوزیس با استفاده از روش توالی‌یابی میکروب‌شناسی و ایمنولوژی Microbiology and Immunology پژوهشي Original <p dir="RTL"><strong><u>زمینه:</u></strong><strong>طی سال‌های اخیر، بروز و گسترش مقاومت داروئی در <em>مایکوباکتریوم توبرکلوزیس</em>، باکتری مولد سل، این بیماری را در اولویت‌های سازمان بهداشت جهانی هم‌ردیف بیماری‌هایی مانند ایدز و هپاتیت قرار داده است. بررسی دقیق ژنوتیپ سویه‌های کلینیکی مقاوم و حساس برای غلبه بر مقاومت دارویی ایجاد شده ضرورت دارد. از میان سیستم‌های متعدد ترمیم تنها تعداد محدودی ژن کد کننده آنزیم‌های ترمیم </strong><strong><span dir="LTR">DNA</span></strong><strong>در مایکوباکتریوم توبرکلوزیس وجود دارد. این ژنها عموماً حفاظت شده‌اند و هر گونه تغییر در آنها احتمالاً باعث افزایش رخداد موتاسیون به دلیل عدم امکان تصحیح موتاسیون‌های خود به خودی در سویه‌های حساس این باکتری می‌شوند. ژن‌های </strong><strong><span dir="LTR">mut</span></strong><strong> آنزیم‌های ترمیم کننده </strong><strong><span dir="LTR">DNA</span></strong> <strong>را کد می‌کنند. در این مطالعه موتاسیون در این ژن‌ها و تأثیر این موتاسیون در ایجاد مقاومت داروئی توبرکلوزیس بررسی شد.</strong></p> <p dir="RTL"><strong><u>موادوروش‌ها</u></strong><strong><span dir="LTR">:</span></strong> <strong>در این تحقیق از ۲۹ نمونه کلینیکی موجود، 8 سویه حساس و 21 سویه مقاوم انتخاب و پس از سفارش پرایمرهای مناسب و انجام واکنش تکثیر دو نوع آمپلیکون شامل قطعاتی از ژن‌های </strong><strong><span dir="LTR">mut T2</span></strong> <strong>و </strong><strong><span dir="LTR">mut T4</span></strong><strong> تولید و به منظور توالی‌یابی ارسال شد.</strong></p> <p dir="RTL"><strong><u>یافته‌ها:</u></strong><strong>نتایج حاصل از واکنش زنجیره‌ای پرایمر نشان دهنده انتخاب مناسب پرایمرهای مورد بررسی بود. نتایج توالی‌یابی نشان داد در مجموع 73 درصد سویه‌های مقاومی که برای بررسی ژن </strong><strong><span dir="LTR">mut T4</span></strong> <strong>انتخاب شده بودند، فاقد جهش در کدون ۴۸ ژن </strong><strong><span dir="LTR">mut T4</span></strong><strong> و 70 درصد از سویه‌های مقاوم نیز فاقد موتاسیون </strong><strong><span dir="LTR">GGA>>>CGA</span></strong><strong> در محل کدون ۵۸ از ژن </strong><strong><span dir="LTR">mut T2</span></strong><strong> بودند.</strong></p> <p dir="RTL"><strong><u>نتیجه‌گیری:</u></strong><strong>یکی از راهکارهای غلبه بر مقاومت دارویی سل بررسی دقیق ژنوتیپ سویه‌های بالینی مقاوم و حساس است. نتایج این مطالعه با بررسی تغییر در توالی ژن‌های </strong><strong><span dir="LTR">mut T2</span></strong><strong> و </strong><strong><span dir="LTR">mut T4</span></strong><strong> انجام گرفت</strong><strong><span dir="LTR">.</span></strong><strong> موتاسیون در </strong><strong><span dir="LTR">mut T2</span></strong><strong> همیشه مرتبط با موتاسیون در</strong><strong><span dir="LTR">mut T4</span></strong><strong> است به این صورت که اولین موتاسیون ممکن است در </strong><strong><span dir="LTR">mut T4</span></strong><strong> و پس از آن موتاسیون دوم در </strong><strong><span dir="LTR">mut T2</span></strong><strong>رخ می‌دهد. اهمیت این امر با بررسی پروتئین‌های کد شده توسط این دو ژن و حالت قرارگیری </strong><strong><span dir="LTR">mut t4</span></strong><strong> نسبت به </strong><strong><span dir="LTR">mut T2</span></strong><strong> در ساختار فضایی کمپلکس پروتئینی </strong><strong><span dir="LTR">MUTHLS</span></strong> <strong>مشخص می‌گردد. نتایج مقایسه بررسی مقاومت دارویی و وجود موتاسیون در </strong><strong><span dir="LTR">hot-spot</span></strong><strong>های ژن‌های </strong><strong><span dir="LTR">mut T2</span></strong> <strong>و </strong><strong><span dir="LTR">mut T4</span></strong><strong> حاکی از کانزرو بودن ژن‌های مورد مطالعه در سویه‌های مقاوم است. هرچند در سویه‌های حساس این ارتباط بی‌معنا است.</strong></p> <p><strong><u>Background:</u></strong>during recent years, the incidence and spread of drug resistance in <em>Mycobacterium tuberculosis</em>, the bacterium causing tuberculosis, has set this disease in World Health Organizationpriorities alignment of diseases like AIDS and hepatitis. Study of close examination of resistant and susceptible clinical strains genotypes is necessary to overcome drug resistance. Among the numerous repair systems, only there are limited number of encoding genes of DNA repair enzymes in <em>Mycobacterium tuberculosis</em>. Commonly these genes have been conserved and any changes among them likely increasethe mutation occurance due to the impossibility of correctionof spontaneous mutations insensitive strains of this bacteria.mut genes encodeDNA repairable enzymes.This study investigated the mutations in these genes and the effect of these mutations on tuberculosis drug resistance.</p> <p><strong><u>Materials&Methods</u></strong><u>:</u> In this study,of 29 available specimens,we were selected 8 susceptible strains and 21 resistantstrains andafter ordering appropriate primers and performing the proliferation reaction two types of amplicons produced which includingfragments of genes <em>mut</em> T2 and <em>mut</em> T4 and they were sent inorder to sequencing.</p> <p><strong><u>Results</u></strong><u>:</u>The results of chain reactionprimer represents an appropriate choice of primerswhich were investigated. Sequencing results showed that overall 73% of resistant strains that had been selected for study of <em>mut</em>T4gene, have no mutations in codons 48of mutT4 gene, and 70% of resistant strains have no GGA >>> CGA mutation at codon 58 of <em>mut</em>T2 gene.</p> <p><strong><u>Conclusion</u></strong><strong>:</strong> One of the strategies to overcome tuberculosis drug resistance is a close examination of genotypes of resistant and susceptible clinical strains. Results of this study was performedby examining changes in <em>mut</em> T2 and <em>mut</em> T4 gene sequence. The mutation in <em>mut</em> T2 always associated with mutation in <em>mut</em> T4, in this way, the first mutation may occurs in <em>mut</em> T4and after that, the second mutationmay occurs in <em>mut</em> T2. Importance of this is determined by study of encoded proteins by these two genes and position of <em>mut</em> t4than<em>mut</em> T2 in the MUT HLS spatial structure of protein complex. Results of comparison of drug resistance and occurrence of mutations in hot-spots of <em>mut</em> T2 and <em>mut</em> T4 genes illustrated that these genes are conserved in resistant strains. However, there is no significant relation in susceptible strains.</p> <p></p> مایکوباکتریوم توبرکلوزیس, mut T2, PCR, تعیین توالی Mycobacterium tuberculosis, mut T2, PCR, sequencing 351 360 http://ismj.bpums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3-700&slc_lang=fa&sid=1 AmirPoyan Afzali امیرپویان افضلی 570031947532846009269 570031947532846009269 No Department of Microbiology, Faculty of Science, Islamic Azad University of Tehran Research گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی اراک Mohammad Arjomndzadegan محمد ارجمندزادگان 570031947532846009270 570031947532846009270 No Infectious Diseases Research center (IDRC) and Department of Microbiology and Immunology, School of medicine, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran مرکز تحقیقات بیماری‌های عفونی، گروه میکروبیولوژی و ایمونولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران Azam Ahmadi اعظم احمدی azam.ahmadi@modares.ac.ir 570031947532846009271 570031947532846009271 Yes Department of molecular genetics, Tarbiat Modarres University, Tehran and Infectious Diseases Research center (IDRC), Arak University of Medical Sciences, Arak , Iran گروه ژنتیک مولکولی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس تهران و مرکز تحقیقات بیماری‌های عفونی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران Seyyed Hossein Hosseini سیدحسین حسینی 570031947532846009272 570031947532846009272 No Department of Microbiology, Faculty of Science, Islamic Azad University of Tehran Research گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی اراک Manijeh Kahbazi منیژه کهبازی 570031947532846009273 570031947532846009273 No Infectious Diseases Research center (IDRC), Department of Pediatric Infectious, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran مرکز تحقیقات بیماری‌های عفونی،گروه اطفال،دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران Mojtaba Tousheh مجتبی توشه 570031947532846009274 570031947532846009274 No Department of Cellular and Molecular Biology, Faculty of Science, University of Isfahan گروه سلولی مولکولی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه اصفهان