fa شناسایی باکتری اشریشیا کلی سویه O157:H7 با استفاده از پرایمرهای اختصاصی برای ژن‌های rfbE و stx2b بیوشیمی Biochemistry. Cell Biology and Genetics پژوهشي Original <p dir="RTL" style="text-align:justify;direction:rtl;unicode-bidi:embed;"><strong><u><span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">زمینه</span></span></span></u></strong><strong><u><span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">:</span></span></span></u></strong> <strong><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">باکتری <em>اشریشیا کلی</em> سویه </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">O157:H7</span></span></strong> <strong><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">جزء پاتوژن‌های روده‌ای می‌باشد که آسیب‌های جدی را بر دستگاه گوارش پدید می‌آورد. شناسایی این باکتری که قابلیت تولید توکسین را داراست و عامل اصلی عفونت‌های بیمارستانی محسوب می‌شود، عموماً از طریق کشت بر روی محیط سوربیتول مکانکی آگار انجام می‌شود که آزمونی زمانبر است. هدف از انجام این پژوهش فراهم ساختن روشی سریع و دقیق به منظور شناسایی این باکتری با استفاده از روش مولکولی مبتنی بر تکنیک </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">PCR</span></span></strong><strong><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;"> بود.</span></span></strong></p> <p dir="RTL" style="text-align:justify;direction:rtl;unicode-bidi:embed;"><strong><u><span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">مواد و روش‌ها:</span></span></span></u></strong> <strong><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">ژن‌های </span></span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">rfbE</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;"> و </span></span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">stx2b</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;"> برای شناسایی اختصاصی <em>اشریشیا کلی</em> سویه </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">O157:H7</span></span></strong><strong><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;"> انتخاب شدند و پس از طراحی پرایمرهای اختصاصی، تکثیر ژن‌ها توسط </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">PCR</span></span></strong><strong><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;"> صورت پذیرفت. از محیط کشت اختصاصی سوربیتول مکانکی آگار برای بررسی قابلیت رشد کلنی‌های انتخاب شده طی فرآیند </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">PCR</span></span></strong><strong><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;"> استفاده گردید.</span></span></strong></p> <p dir="RTL" style="text-align:justify;direction:rtl;unicode-bidi:embed;"><strong><u><span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">یافته‌ها:</span></span></span></u></strong> <strong><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">با ظهور باندهای مربوط به ژن‌های </span></span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">rfbE</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;"> و </span></span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">stx2b</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;"> بر روی ژل آگارز تأیید گردید که پرایمرهای طراحی شده توانسته‌اند به خوبی وجود ژن </span></span></strong><strong><em><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">rfbE</span></span></em></strong><strong><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;"> و توکسین شیگا را در نمونه متعلق به باکتری <em>اشریشیا کلی</em> سویه</span></span></strong> <strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">O157:H7</span></span></strong><strong><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;"> شناسایی نمایند. کلنی‌های انتخاب شده طی </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">PCR</span></span></strong><strong><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:9.0pt;">‌</span></span></strong><strong><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;"> قابلیت رشد بر روی محیط سوربیتول مکانکی آگار را داشتند.</span></span></strong></p> <p dir="RTL" style="text-align:justify;direction:rtl;unicode-bidi:embed;"><strong><u><span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">نتیجه‌گیری:</span></span></span></u></strong> <strong><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">مشخص گردید که ما می‌توانیم روشی سریع، دقیق و نسبتاً راحت را برای شناسایی پاتوژن <em>اشریشیا کلی</em> سویه </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">O157:H7</span></span></strong><strong><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;"> با استفاده از تکنیک </span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;">PCR</span></span></strong><strong><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;"> و وجود پرایمرهای اختصاصی نسبت به سایر روش‌های موجود فراهم کنیم.&nbsp;</span></span></strong></p> <p style="text-align: justify;"><strong>Background</strong>: <em>E. coli </em>O157:H7 is one of the intestinal pathogens which can cause severe lesions in the gastrointestinal system. These bacteria can produce toxins and are the main cause of hospital infections. Their detection is usually done by culture on sorbitol-MacConkey agar which is a time-consuming test. The aim of this study was to develop a rapid, yet accurate method to identify this bacterium using a PCR based technique.<br> <strong>Material and Methods</strong>: <em>rfbE</em> and <em>stx2b</em> genes were selected for identification of specific <em>E. coli </em>O157:H7 strain. Then amplification was performed by PCR following designing specific primers.&nbsp;Sorbitol-MacConkey agar was used to verification of growth ability of selected colonies during PCR.<br> <strong>Results</strong>: By the appearance of the bonds belong to <em>rfbE</em> and <em>stx2B</em> genes on an agarose gel, the ability of designed primers for gene detection in samples of <em>E .coli</em> O157:H7 was verified. A sorbitol-MacConkey agar medium was used to evaluate the growing potency of colonies selected during PCR. <span dir="RTL"></span><br> <strong>Conclusion:</strong> In this study we demonstrated that we could develop a fast, accurate, and relatively comfortable method for detection of <em>E. coli</em> O157:H7 strain by using PCR technique and specific primers instead of using current methods.<br> &nbsp;<br> &nbsp;</p> شناسایی اشریشیا کلی سویه O157:H7, واکنش زنجیره‌ای پلیمراز, ژن rfbE, ژن stx2b Identification of E. coli O157:H7 strain, polymerase chain reaction, rfbE gene, stx2b gene 267 277 http://ismj.bpums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3-775&slc_lang=fa&sid=1 Mostafa Bakhshi مصطفی بخشی 5700319475328460010020 5700319475328460010020 No Department of Biology, School of Basic Science, Imam Hossein University, Tehran, Iran مرکز علم و فناوری زیستی، دانشکده و پژوهشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران Firouz Ebrahimi فیروز ابراهیمی 5700319475328460010021 5700319475328460010021 No Department of Biology, School of Basic Science, Imam Hossein University, Tehran, Iran مرکز علم و فناوری زیستی، دانشکده و پژوهشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران Shahram Nazarian شهرام ناظریان kpnazari@ihu.ac.ir 5700319475328460010022 5700319475328460010022 Yes Department of Biology, School of Basic Science, Imam Hossein University, Tehran, Iran مرکز علم و فناوری زیستی، دانشکده و پژوهشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران Yousef Tarverdizade یوسف تاروردی‌زاده 5700319475328460010023 5700319475328460010023 No Department of Biology, School of Basic Science, Imam Hossein University, Tehran, Iran مرکز علم و فناوری زیستی، دانشکده و پژوهشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران Davood Sadeghi داود صادقی 5700319475328460010024 5700319475328460010024 No Department of Biology, School of Basic Science, Imam Hossein University, Tehran, Iran مرکز علم و فناوری زیستی، دانشکده و پژوهشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران