fa استخراج کندروئیتین سولفات از غضروف ماهی خاویاری (Acipenser stellatus) و بررسی اثر القایی آن بر تکثیر فیبروبلاست انسانی عمومى General پژوهشي Original <div style="text-align: justify;"><strong><u><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">زمینه</span></span></span></span></u></strong><strong><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">:</span></span></span></span></strong> <strong><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">کندروئیتین سولفات‌ها از مهم‌ترین گلیکوز آمینوگلیکان‌های موجود در ماهیان خاویاری می‌باشند که در غضروف این ماهیان حضور دارند. این ترکیبات علاوه بر اهمیت در صنایع غذایی، آرایشی و بهداشتی، از اهمیت بالینی در درمان آرتروز و ترمیم زخم نیز برخوردار هستند. </span></span></span></span></strong><br> <strong><u><span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">مواد و روش‌ها</span></span></span></u></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:11.0pt;">:</span></span></span></strong> <strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">در تحقیق حاضر استخراج کندروتین سولفات (</span></span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:9.0pt;">CS</span></span></span></strong><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">) از غضروف ماهی ازون برون (۲۵/۰ گرم پودر غضروف ماهی در ۱۰ میلی‌لیتر بافر </span></span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:9.0pt;">PBS1X</span></span></span></strong><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">) توسط هضم آنزیمی تریپسین وپپسین در زمان‌های ۱۲ و ۱۸ ساعت و با استفاده از نمک کاتیونی ستیل پیریونیوم کلراید (روش </span></span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:9.0pt;">CPC</span></span></span></strong><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">) انجام شد. به منظور بررسی تأثیر کندروتین سولفات بر القای تکثیر فیبروبلاست‌های جدا شده از پوست انسان از روش رنگ‌سنجی </span></span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:9.0pt;">MTT</span></span></span></strong><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;"> در دوره‌های زمانی ۲۴، ۴۸ و ۷۲ ساعت استفاده گردید. بهترین زمان و مناسب‌ترین هضم آنزیمی توسط تیمار حرارتی با آنزیم‌های تریپسین وپپسین از روی الگوی الکتروفورز </span></span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:9.0pt;">SDS</span></span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">-</span></span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:9.0pt;">PAGE</span></span></span></strong><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;"> انتخاب شده و آنالیز </span></span></span></strong><a name="OLE_LINK5"></a><a name="OLE_LINK6"><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:9.0pt;">FT-IR</span></span></span></strong></a><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;"> جهت شناسایی نوع کندروئیتین سولفات تخلیص شده بکار رفت. </span></span></span></strong><br> <strong><u><span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">یافته‌ها</span></span></span></u></strong>: <strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">با توجه به الگوی الکتروفورز، تیمار آنزیمی تریپسین با مدت زمان ۱۸ ساعت بیشترین هضم پروتئینی را نشان داد. در این شرایط بازده تولید کندروئیتین سولفات برابر ۷۶/۴ درصد تخمین زده شد. حضور کندروئیتین سولفات از نوع چهارم (</span></span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:9.0pt;">C4S</span></span></span></strong><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">) توسط آنالیز&nbsp;</span></span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:9.0pt;">FT-IR</span></span></span></strong><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;"> مشخص گردید. کندروئیتین سولفات‌های استخراجی از غضروف تأثیر افزایشی وابسته به غلظت بر میزان تکثیر سلول‌های فیبروبلاست را نشان داد، به‌ طوری که در غلظت ۱۰ میکروگرم بر میلی‌لیتر بیشترین افزایش تکثیر برابر با ۱۶۷ درصد، نسبت به کنترل در سلول‌های فیبروبلاست مشاهده گردید.</span></span></span></strong><br> <strong><u><span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:11.0pt;">نتیجه‌گیری</span></span></span></u></strong><strong><u><span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">:</span></span></span></u></strong> <strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b lotus;"><span style="font-size:10.0pt;">کندروتین سولفات تخلیص شده به صورت وابسته به دوز دارای اثر تحریکی بر رشد سلول‌های فیبرویلاست می‌باشد، لذا می‌&zwj;‌تواند در فرایندهای التیام و ترمیم زخم و القای تکثیر سلول‌های فیبروبلاست مؤثر واقع شود.&nbsp;</span></span></span></strong></div> <div style="text-align: justify;"><strong><u>Background:</u></strong> Chondroitin sulfates (CS) is one of the essential glycosaminoglycan&rsquo;s which is found in sturgeon fishes and exists in the cartilage part of these fishes. In addition to food and cosmetic industries, these compounds have significant medical and clinical applications, mainly in the treatment of arthritis and wound healing.<br> <strong><u>Materials and Methods:</u></strong> In this study, the chondroitin sulfate extraction was performed using pepsin and trypsin enzyme digestions in 12 and 18 hours intervals followed by cationic salt, cetyl pyridinium chloride (CPC) treatment. To investigate the effect of Chondroitin sulfate on induction of proliferation of fibroblasts isolated from human skin, MTT assay method was used, which was applied at different incubation times (24, 48 and 72 h). To determine the proper time and enzymatic digestion, after temperature treatment of samples using pepsin and trypsin enzymes, the SDS-PAGE electrophoresis was used. Moreover, the FT-IR analysis was performed to characterize the type of CS.<br> <strong><u>Results</u></strong>: The maximum yield of enzymatic digestion was observed for trypsin digestion at 18h, according to electrophoresis patterns. The amount of CS yield was estimated at 4.76% in this situation. FT-IR analysis revealed that the CS belongs to the C4S type. Chondroitin sulfates extracting from cartilage showed the concentration-dependent effect on fibroblast cell proliferation. This dose-response effect showed 167% increase in proliferation at 10 &micro;g/ml dose of CS compared to the control in fibroblast cells.<br> <strong><u>Conclusion</u></strong>: Extracted CS has a positive stimulatory effect on fibroblast cells proliferation in a&nbsp;dose-dependent manner. So it can be used for fibroblast prolioferation induction for wound healing and repairing damaged tissues.<br> &nbsp;<br> &nbsp;</div> تکثیر سلولی, غضروف, کندرویتین سولفات, ماهی ازون برون Cell proliferation, Cartilage, Chondroitin sulfate, Acipenser stellatus 349 361 http://ismj.bpums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-6&slc_lang=fa&sid=1 Saead Delshad سعید دلشاد 5700319475328460010052 5700319475328460010052 No Young Researchers and Elite Club, Lahijan Branch, Islamic Azad University, Lahijan, Iran<br>Department of Marine Biology, School of Science, Lahijan Branch, Islamic Azad university, Lahijan, Iran باشگاه پژوهشگران جوان و نخبگان، واحد لاهیجان، دانشگاه آزاد اسلامی، لاهیجان، ایران<br>گروه زیست‌شناسی دریا، دانشکده علوم پایه، واحد لاهیجان، دانشگاه آزاد اسلامی، لاهیجان، ایران Katayon karimzadeh کتایون کریم‌زاده karimzadehkathy@yahoo.co.uk 5700319475328460010053 5700319475328460010053 Yes Department of Marine Biology, School of Science, Lahijan Branch, Islamic Azad university, Lahijan, Iran گروه زیست‌شناسی دریا، دانشکده علوم پایه، واحد لاهیجان، دانشگاه آزاد اسلامی، لاهیجان، ایران Ali Mostafaie علی مصطفایی 5700319475328460010054 5700319475328460010054 No Department of Immunology, Medical Biology Research Center, Kermanshah University of Medical Sciences, Kermanshah, Iran گروه ایمونولوژی، مرکز تحقیقات بیولوژی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی، کرمانشاه، ایران