:: دوره 17، شماره 3 - ( دوماهنامه طب جنوب 1393 ) ::
جلد 17 شماره 3 صفحات 390-377 برگشت به فهرست نسخه ها
بهینه نمودن تشخیص مولکولی کریپتوکوکوس نئوفورمنس با استفاده از کنترل داخلی
محمدحسن شاه‌حسینی1، شکوفه بگلری2، منصور بیات3، الهام مسلمی4، محمد قهری5
1- گروه میکروبیولوژی، واحد شهر قدس، دانشگاه آزاد اسلامی تهران ، shahosseiny@yahoo.com
2- گروه زیست‌شناسی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی تهران
مؤسسه ایرانیان ژن فناور (IGF)، تهران
3- گروه علوم دامپزشکی، دانشکده علوم تخصصی دامپزشکی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم و تحقیقات تهران
4- مؤسسه ایرانیان ژن فناور (IGF)، تهران
گروه زیست‌شناسی، واحد تهران شرق، دانشگاه آزاد اسلامی تهران
5- مؤسسه ایرانیان ژن فناور (IGF)، تهران
گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه امام حسین تهران
چکیده:   (8301 مشاهده)

زمینه: نبود کنترل داخلی در پژوهش‌های انجام گرفته در زمینه PCR‌های تشخیصی محدودیتی مهم محسوب می‌گردد. به‌کارگیری تکنیک‌های آزمایشگاهی حساس و اختصاصی همچون PCR در تشخیص کریپتوکوکوزیس، ضروری است. روش‌های متنوعی برای تشخیص این قارچ بیماری‌زا وجود دارد. به‌طورکلی روش‌های مبتنی بر کشت، تکنیک‌های وقت‌گیر با حساسیت پایین هستند و نیازمند امکانات و تجربه کافی برای تفسیر نتایج می‌باشند و همچنین روش‌های رنگ‌آمیزی نیزحساسیت لازم را ندارند. در نتیجه روش‌های مولکولی از جمله PCR، تکنیک‌های مناسب‌تری برای شناسایی هستند. هدف این مطالعه طراحی و ساخت کنترل داخلی تکثیری پلاسمیدی (IAC) جهت شناسایی ممانعت کننده‌ها در آزمایش PCR کریپتوکوکوس نئوفورمنس (C.neo) و کاربردهای آتی در لابراتوارهای روتین تشخیصی بوده است. مواد و روش‌ها: در این بررسی برای ساخت کنترل داخلی، ابتدا پرایمرهای ویژه آزمایش PCR، بر مبنای هدف ژنی 16S rRNA جهت تشخیص مولکولی، بهینه و سپس حساسیت و ویژگی مشخص شد. پرایمرهای مرکب (Composite Primer) برای IAC-C.neo نیز طراحی، تکثیر و سپس کلون گردید. IAC-C.neo تکثیر شده در پلاسمید pTZ57R الحاق و در باکتری اشریشیا کلی JM107 ترانسفورم و کلون گردید. تعداد حداقل IC در هر واکنش PCR با رقیق‌سازی و همچنین طیف پاسخ PCR همراه با IC مورد بررسی قرار گرفت یافته‌ها: اندازه محصول تشخیصی C.neo با پرایمرهای اختصاصی آن برابر با bp 415 و محصول IAC-C.neo برابر با 661 جفت باز بود، که از نظر اندازه، اختلاف مطلوب (246 جفت باز) را با هم دارند. تعداد حداقل IC در هر واکنش 1000 عدد تعیین شد. حداقل و حداکثر حساسیت آزمایش PCR همراه با IC برای DNA کریپتوکوکوس نئوفورمنس بین 3 میلیون تا 100 عدد کریپتوکوکوس مشخص گردید. در آزمایش ویژگی با عوامل مختلف هیچ محصول ناخواسته‌ای مشاهده نشد. نتیجه‌گیری: علیرغم سرعت و دقت بالای تکنیک PCR، یافته‌های منفی و مثبت کاذب که به‌دلایل مختلف رخ می‌دهند از مشکلات مهم این تکنیک جذاب می‌باشد که می‌توانند کارایی آن را کاهش دهند. استفاده از یک کنترل داخلی در تشخیص مولکولی کریپتوکوکوس نئوفورمنس، این خطاها را شناسایی می‌نماید.

واژه‌های کلیدی: کنترل داخلی تکثیری، کریپتوکوکوس نئوفورمنس، PCR
متن کامل [PDF 992 kb]   (1749 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: عمومى
دریافت: 1391/10/15 | پذیرش: 1391/12/16 | انتشار: 1393/3/25


XML   English Abstract   Print



بازنشر اطلاعات
Creative Commons License این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است.
دوره 17، شماره 3 - ( دوماهنامه طب جنوب 1393 ) برگشت به فهرست نسخه ها