حسین سمیعی ابیانه، شهرام نظریان، امیر رضایی، نهال هادی، کوثر کیوان شکوه،
دوره ۲۷، شماره ۲ - ( ۹-۱۴۰۳ )
زمینه: پیشرفت مقاومت آنتی‌بیوتیکی یک عامل نگران کننده جهانی برای مقابله با شیگلوزیس می‌باشد. توسعه افلاکس پمپ‌ها از جمله پمپ AcrAB−TolC موجب گسترش مقاومت آنتی‌بیوتیک در سویه‌های شیگلا فلکسنری شده است. هدف از این تحقیق تولید IgY علیه ایمونوژن نوترکیب TolC و ارزیابی میزان اتصال آن به ایمونوژن نوترکیب بود.
مواد و روش‌ها: پس از طراحی و سنتز سازه حاوی نواحی ایمونوژن پروتئین TolC، پلاسمید نوترکیب pET۲۸a-tolC به سلول‌های مستعد (DE۳)E. coli BL۲۱ ترانسفورم شد. بیان پروتئین نوترکیب با غلظت ۱ میلی‌مولار IPTG القا گردید. پروتئین نوترکیب به روش کروماتوگرافی میل ترکیبی با استفاده از رزین (Ni-NTA) Nickel-Nitrilotriacetic acid تخلیص و با وسترن بلاتینگ ارزیابی شد. ایمن‌سازی مرغ‌های نژاد لگهورن با ۲۰۰ میکروگرم از پروتئین نوترکیب انجام شد. آنتی‌بادی مرغی به روش ترسیب با پلی اتیلن گلیکول (PEG) استحصال و ارزیابی تیتر آنتی‌بادی در سرم و زرده تخم مرغ، در مرغ‌های ایمن شده در مقایسه با گروه کنترل به روش الایزا تعیین گردید.
یافته‌ها: پروتئین نوترکیب TolC با وزن مولکولی ۴۰ کیلودالتون و بازده بیانی ۱۰ میلی‌گرم بر لیتر محیط کشت بیان شد. غلظت آنتی‌بادی مرغی تخلیص شده ۹ میلی‌گرم بر میلی‌لیتر از زرده تخم مرغ بود. نتایج تیتر آنتی‌بادی در سرم علیه پروتئین نوترکیب پس از تزریق سوم تا رقت ۱ به ۶۴۰۰ معنی‌دار بود (۰/۰۵>P). در روش الایزا حداقل ۷ نانوگرم از آنتی‌بادی به پروتئین نوترکیب واکنش نشان داد.
نتیجه‌گیری: آنتی‌بادی‌های حاصل از ایمونوژن نوترکیب TolC می‌توانند به عنوان منبع ایمنی غیرفعال در بیماری ایجاد شده توسط شیگلا فلکسنری مورد بررسی قرار گیرند.
