TY - JOUR T1 - Effect of the Kozak sequence on transient expression of human coagulation factor IX (FIX) minigene in mammalian cells TT - تأثیر توالی کوزاک در بیان موقت مینی‌ژنی از فاکتور 9 انعقادی در سلول‎های پستاندار JF - ISMJ JO - ISMJ VL - 11 IS - 2 UR - http://ismj.bpums.ac.ir/article-1-144-fa.html Y1 - 2009 SP - 98 EP - 107 KW - Kozak sequence KW - eukaryotic genes expression KW - recombinant protein KW - factor IX N2 - زمینه: قابلیت توالی کوزاک در افزایش بیان ژن های یوکاریوتی مشخص شده است. با توجه به این موضوع می توان از این توانمندی در جهت افزایش بیان پروتئین های نوترکیب استفاده کرد. مواد و روش‌ها: با هدف بالا بردن بیان ژن فاکتور IX انعقادی، سازه ای بیانی مجهز به پروموتر سایتومگالو ویروس انسانی (CMV) که بیان یک مینی ژن فاکتور IX را تحت کنترل داشت، به توالی کوزاک تجهیز شد. پس از تأیید صحت سازه نوترکیب، این سازه به همراه یک سازه بیان کننده فاکتور IX فاقد کوزاک (به عنوان کنترل مثبت) و یک پلاسمید pcDNA3 (به عنوان کنترل منفی) برای ترانسفکشن سلول های تخمدان هامستر چینی (CHO) در سه آزمایش مستقل مورد استفاده قرار گرفتند. محیط کشت سلول های ترانسفکت شده به منظور آشکارسازی بیان فاکتور IX انسانی پس از 2 و 3 روز جمع آوری و مورد آزمون یک مرحله ای انعقاد قرار گرفت. یافته‌ها: نتایج بدست آمده در مقایسه با کنترل منفی بیانگر بیان فاکتور IX فعال توسط دو گروه سلول های ترانسفکت شده با پلاسمید‎های نوترکیب بود. مقایسه ابتدایی میزان بیان دو گروه سلول های ترانسفکت شده با دو سازه نوترکیب، نشانگر افزایش بیان توسط سلول هایی است که حاوی توالی کوزاک هستند. نتیجه گیری: علاوه بر تأیید نقش افزاینده کوزاک بر بیان فاکتور IX، در این طرح با ساخت پلاسمیدهای بیانی ابزار مناسبی برای مطالعه سیستماتیک بیان فاکتور IX انسانی فعال فراهم شد. M3 ER -