fa تشخیص همزمان سل ریوی و تعیین مقاومت داروئی به ایزونیازید در سویه‌های کلینیکی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس با استفاده از روش PCR-RFLP بیماری‌های واگیر Communicable Diseases پژوهشي Original <p>زمینه: تشخیص سریع و درمان دارویی مناسب اولین اقدام برای کنترل اپیدمی سل و سل مقاوم به دارو است. در مطالعه حاضر روش مولکولی PCR-RFLP جهت تشخیص سریع سویه‌های کلینیکی و تعیین مقاومت آن به ایزونیازید مورد استفاده قرار گرفت. مواد و روش‌ها: در مطالعه حاضر تعداد 87 نمونه کلینیکی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس مورد بررسی قرار گرفت. ابتدا با کمک PCR جستجو و تکثیر ژن katG قطعه bp620 برای تأیید مولکولی در تشخیص باکتری صورت گرفت. سپس محصول PCR با کمک RFLP و با استفاده از آنزیم مناسب برش داده شده و الگوهای به‌دست آمده در الکتروفورز، به منظور تشخیص موتاسیون در 315 katG مورد بررسی قرار گرفت. جهت تأیید نهایی، تعدادی از نمونه‌ها تعیین توالی شدند. یافته‌ها: در مطالعه حاضر تمامی سویه‌های مورد مطالعه باند bp620 را نشان دادند که مؤید مایکوباکتریوم توبرکلوزیس بود. علاوه‌بر این، از 46 سویه مقاوم به ایزونیازید، در روش RFLP-PCR نشان داده شد که 44 سویه دارای موتاسیون در Ser315Thr ژن katG بودند. از 41 سویه حساس هیچ کدام در کدون 315 katG موتاسیون نداشتند. از طرفی نتایج تعیین توالی، تأیید کننده‌ی تعیین موتاسیون به‌روش مولکولی مورد استفاده بود. در این تحقیق برای تست RFLP-PCR حساسیت 6/95 درصد (98/0-85/0:CI 95 درصد) و ویژگی 100 درصد (1/0-91/0:CI 95 درصد) محاسبه گردید. نتیجه‌گیری: نتایج مطالعه حاضر نشان می‌دهد که روش PCR-RFLP قادر به شناسایی مقاومت به ایزونیازید در 95 درصد موارد بوده و می‌تواند در یک آزمایش به‌صورت همزمان جهت تشخیص سل ریوی و تعیین مقاومت داروئی به ایزونیازید در سویه‌های کلینیکی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس مورد استفاده قرار گیرد.</p> <p>Background: Early detection and suitable drug admission are the first attempts to control of TB and MDR-TB. In this study, PCR-RFLP method was used for rapid detection of Mycobacterium tuberculosis and resistance to isoniazid. Materials and Methods: In the present study, 87clinical isolates of MTB were used in a PCR-RFLP method. The RFLP-PCR assay by specific primer was used for two purposes In the first, PCR of katG gene for diagnosis of bacteria and in the second step, PCR product by endonuclease enzyme in a RFLP reaction produced a pattern in electrophoresis for mutation detection in katG315. Sequencing method was used for confirmation of RFLP results. Results: The study showed that all studied strains produced band 620bp that confirmed MTB. From the 46 resistant strains to isoniazid, the RFLP-PCR method showed that 44 strains had mutations in the katG gene Ser315Thr. The 41 susceptible strains had not any mutation at the codon. Results of sequencing were confirmed results of the molecular method. Sensitivity of RFLP-PCR test was 95.6% (95% CI :0.85-0 .98) and specificity was 100% (95% CI :0.91-1 .0). Conclusion: RFLP-PCR test is a good tool for simultaneous diagnosis and detection of katG315 mutation in clinical isolates of MTB.</p> مایکوباکتریوم توبرکلوزیس, تشخیص, مقاومت داروئی, katG, PCR-RFLP Mycobacterium tuberculosis, diagnosis, drug resistance, katG, PCR-RFLP 547 555 http://ismj.bpums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3-610&slc_lang=fa&sid=1 Maryam alsadat Tayeboon مریم السادات طیبون 570031947532846008478 570031947532846008478 No Infectious Diseases Research Center, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran مرکز تحقیقات بیماری‌های عفونی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران Maryam Sadrnia مریم صدرنیا msadrnia@yahoo.com 570031947532846008479 570031947532846008479 Yes Department of Biology, Payame Noor University, I.R. of Iran گروه زیست‌شناسی، دانشگاه پیام نور Hamidreza Mohajerani حمیدرضا مهاجرانی 570031947532846008480 570031947532846008480 No Department of Microbiology, Islamic Azad University, Arak Branch, Arak, Iran گروه زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد اراک، اراک، ایران