Iranian South Medical Journal

fa کلونینگ و بررسی بیان ژن flaA هلیکوباکتر پیلوری در سیستم یوکاریوتی Cloning and Study of Expression of Helicobacter Pylori FlaAGene in Eukaryotic System بیوشیمی Biochemistry. Cell Biology and Genetics پژوهشي Original زمینه: هلیکوباکتر پیلوری شایع‌ترین باکتری است که جوامع انسانی را در ابعاد جهانی مبتلا به عفونت ساخته است. بیان فلاژل و تحرک باکتری در کلونیزاسیون و ویرولانس آن عامل بسیار مهمی است. ژن flaA یکی از ژن‌های کد کننده فلاژلین می‌باشد که نقش کلیدی در حرکت باکتری و کلونیزاسیون آن دارد و از نظر ایمنی بخشی نیز مورد توجه می‌باشد. هدف از این مطالعه طراحی، ساخت سازواره و بررسی بیان ژن flaA هلیکوباکتر پیلوری در سلول‌های یوکاریوتی است. موادوروش‌ها: در این مطالعه تجربی، ابتدا از هلیکوباکتر پیلوری سویه استاندارد، DNA ژنومی تخلیص و ژن flaA با پرایمرهای اختصاصی به روش PCR تکثیر و جداسازی شد. سپس با بهره‌گیری از تکنیک همسانه سازی T/A در پلاسمید pTZ کلون گردید. به منظور بیان ژن flaA و ایجاد سازواره نهایی، ژن flaA از پلاسمید pTZ خارج شد و در وکتور بیانی (-)pcDNA3.1 ساب کلون گردید. سازواره -flaA(-)pcDNA3.1 به روش الکتروپوریشن به سلول جانوری CHO منتقل و بیان یوکاریوتی ژن flaA با تکنیک SDS-PAGE بررسی شد. یافته‌ها: نتایج نشان می‌دهد محصول PCR ژن flaA در وکتور pTZ کلون و در باکتری اشریشیا کلای سویه TOP10F تکثیر یافته است. همچنین هضم آنزیمی و تعیین توالی حاکی از تشکیل سازواره نهایی -flaA(-)pcDNA3.1 است. در نهایت بررسی بیان ژن flaA هلیکوباکتر پیلوری در سلول جانوری CHO، نشان داد سازواره ژنی حاصل قادر به بیان موفق محصول ژن flaA در سیستم یوکاریوتی می‌باشد. نتیجه‌گیری: با توجه به اینکه سازواره نهایی -flaA(-)pcDNA3.1 قادر به بیان محصول پروتئینی ژن flaA هلیکوباکتر پیلوری در سلول‌های جانوری می‌باشد و پروتئین فلاژلین یکی از آنتی ژن‌های مهم این باکتری است. بنابراین به درستی می‌توان گفت که سازواره ژنی -flaA(-)pcDNA3.1 کاندیدای مناسبی برای استفاده در زمینه واکسن‌های ژنی علیه هلیکوباکتر پیلوری می‌باشد و در تحقیقات آینده می‌توان از آن برای بررسی ایمنی زایی در حیوانات آزمایشگاهی بهره گرفت. Background: Helicobacter pylori is the most common bacterium causing chronic infections worldwide. Expression of flagella and bacterial motility are essential in colonization and virulence. FlaA gene is one of the flagellin-encoding genes that play the key role in the colonization and bacterial motility, and it has a significant impact on immunization. This study aimed to design, construct and evaluate the Helicobacter pylori flaA gene expression in eukaryotic cells. Material and Methods: In this experimental study, genomic DNA was purified from the Helicobacter pylori standard strain, and flaA gene was amplified and isolated by PCR method with using the specific primers. Then, this gene was cloned into pTZ vector by T/A cloning technique. To express flaA gene and generate the final construct, the flaA gene was removed from pTZ plasmid and subcloned into the pcDNA3.1 (-) expression vector. The pcDNA3.1 (-)-flaA construct was transformed into CHO cells by electroporation, and flaA eukaryotic gene expression was studied using the SDS-PAGE method. Results: The results showed that flaA gene PCR product was cloned into pTZ vector and amplified in Escherichia coli TOP10F strain. Also, the enzymatic digestion and sequencing showed that the pcDNA3.1 (-)-flaA was performed. Finally, the evaluation of the Helicobacter pyloriflaA gene expression in CHO cells showed that the generated gene construct could express the flaA product in a eukaryotic system, successfully. Conclusion: Given that the pcDNA3.1 (-)-flaA as a final construct can express the flaA protein of the Helicobacter pylori in animal cells. Flagellin protein is one of the essential antigens of the bacterium So we can appropriately say that gene pcDNA3.1(-)-flaA construct is a suitable candidate for usage in the field of gene vaccines against Helicobacter pylori and it can be used to check the immunization in the laboratory animals in the future research.     هلیکوباکتر پیلوری, ژن flaA, کلون‌سازی, الکتروپوریشن Helicobacter pylori, flaA gene, Cloning, Electroporation 245 256 http://ismj.bpums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-1&slc_lang=fa&sid=1 Motaram Sadeghi محترم صادقی 5700319475328460010722 5700319475328460010722 No Biotechnology Research Center, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Shahrekord, Iran مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران Abbas Doosti عباس دوستی abbasdoosti@yahoo.com 5700319475328460010723 5700319475328460010723 Yes Biotechnology Research Center, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Shahrekord, Iran مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران