دوره 23، شماره 2 - ( دو ماهنامه طب جنوب 1399 )
جلد 23 شماره 2 صفحات 152-143 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Taherzadeh M, Fouladvand M, Kazemi B. Comparative Evaluation of Expression Vectors (pET32a and pET25b) in Expression of Polyepitopic Sequence Synthesized from
Leishmania infantum Antigens. Iran South Med J 2020; 23 (2) :143-152
URL: http://ismj.bpums.ac.ir/article-1-1295-fa.html
URL: http://ismj.bpums.ac.ir/article-1-1295-fa.html
طاهرزاده مرضیه، فولادوند مرادعلی، کاظمی بهرام. مقایسۀ وکتورهای بیانی pET32a و pET25b در بیان توالی پلی اپیتوپی سنتز شده از آنتی‌ژن‌های انگل لیشمانیا اینفانتوم. مجله طب جنوب. 1399; 23 (2) :143-152
1- گروه میکروبیولوژی، دانشکده کشاورزی و علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی واحد شیراز، شیراز، ایران
2- مرکز تحقیقات زیست فناوری دریایی خلیج‌فارس، پژوهشکده علوم زیست پزشکی خلیج‌فارس، دانشگاه علوم پزشکی بوشهر، بوشهر، ایران ، mfooladvand39@yahoo.com
3- مرکز تحقیقات بیولوژی سلولی و مولکولی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، تهران، ایران3
2- مرکز تحقیقات زیست فناوری دریایی خلیج‌فارس، پژوهشکده علوم زیست پزشکی خلیج‌فارس، دانشگاه علوم پزشکی بوشهر، بوشهر، ایران ، mfooladvand39@yahoo.com
3- مرکز تحقیقات بیولوژی سلولی و مولکولی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، تهران، ایران3
چکیده: (2854 مشاهده)
زمینه: امروزه از روش‌های مولکولی در تشخیص بیماری‌ها، تولید واکسن‌ها، داروها و تولید پروتئین‌های نوترکیب استفاده می‌شود، لذا یکی از مراحل مهم انتخاب وکتور مناسب برای کلون و بیان ژن‌های هدف است. از آنجا که بیان پلی‌ژن‌های سنتتیک یا اصطلاحاً آنتی‌ژن‌های کایمریک با وزن مولکولی بالا نیاز به شرایط ویژه‌ای دارد، مطالعۀ حاضر به هدف ارزیابی میزان اهمیت نوع وکتور برای بیان اینگونه آنتی‌ژن‌ها انجام شد.
مواد و روش‌ها: توالی 1250 جفت بازی متشکل از اپی‌توپ‌های هشت آنتی ژن مهم انگل لیشمانیا اینفانتوم طراحی و توسط شرکت بیوماتیک (کانادا) سنتز شد، توالی به‌صورت جداگانه درون دو وکتور بیانی pET25b و pET32a کلون و سپس به باکتری (DE3) E.coli BL21ترانسفورم و تحت شرایط مشابه بیان شدند. لیزابه باکتری توسط SDS PAGE بررسی و با وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت.
یافته‌ها: نتایج SDS PAGE و وسترن بلات نشان داد که تولید پروتئین نوترکیب کامل و بی‌نقص توسط وکتور pET25b موفقیت‌آمیز نبوده است. این در حالی بود که پروتئین نوترکیب حاصل از بیان توالی پلی‌اپی‌توپی مذکور در وکتور pET32a به‌صورت موفقیت‌آمیزی تولید و تأئید گردید.
نتیجه‌گیری: با توجه به بیان موفقیت‌آمیز توالی پلی‌اپی‌توپی درون وکتور pET32a و شناسایی و تأئید پروتئین مربوطه، از طرفی عدم موفقیت حصول پروتئین در وکتورpET25b نشان داد که در مورد بیان برخی توالی‌های موزائیکی خاص کم بودن ویژگی حلالیت ممکن است به‌طور کلی دستیابی به پروتئین را با مشکل مواجه کند بنابراین انتخاب نوع وکتور بیانی باید با دقت بیشتری صورت گیرد.
مواد و روش‌ها: توالی 1250 جفت بازی متشکل از اپی‌توپ‌های هشت آنتی ژن مهم انگل لیشمانیا اینفانتوم طراحی و توسط شرکت بیوماتیک (کانادا) سنتز شد، توالی به‌صورت جداگانه درون دو وکتور بیانی pET25b و pET32a کلون و سپس به باکتری (DE3) E.coli BL21ترانسفورم و تحت شرایط مشابه بیان شدند. لیزابه باکتری توسط SDS PAGE بررسی و با وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت.
یافته‌ها: نتایج SDS PAGE و وسترن بلات نشان داد که تولید پروتئین نوترکیب کامل و بی‌نقص توسط وکتور pET25b موفقیت‌آمیز نبوده است. این در حالی بود که پروتئین نوترکیب حاصل از بیان توالی پلی‌اپی‌توپی مذکور در وکتور pET32a به‌صورت موفقیت‌آمیزی تولید و تأئید گردید.
نتیجه‌گیری: با توجه به بیان موفقیت‌آمیز توالی پلی‌اپی‌توپی درون وکتور pET32a و شناسایی و تأئید پروتئین مربوطه، از طرفی عدم موفقیت حصول پروتئین در وکتورpET25b نشان داد که در مورد بیان برخی توالی‌های موزائیکی خاص کم بودن ویژگی حلالیت ممکن است به‌طور کلی دستیابی به پروتئین را با مشکل مواجه کند بنابراین انتخاب نوع وکتور بیانی باید با دقت بیشتری صورت گیرد.
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
انگل‌شناسی
دریافت: 1398/5/20 | پذیرش: 1399/2/26 | انتشار: 1399/4/11
دریافت: 1398/5/20 | پذیرش: 1399/2/26 | انتشار: 1399/4/11
فهرست منابع
1. Mesa-Pereira B, Rea MC, Cotter PD, et al. Heterologous Expression Of Biopreservative Bacteriocins With A View To Low Cost Production. Front Microbiol 2018; 9: 1654. [DOI:10.3389/fmicb.2018.01654]
2. Rosano GL, Ceccarelli EA. Recombinant Protein Expression In Escherichia Coli: Advances And Challenges. Front Microbiol 2014; 5: 172. [DOI:10.3389/fmicb.2014.00172]
3. Faria AR, De Castro Veloso L, Coura-Vital W, et al. Novel Recombinant Multiepitope Proteins For The Diagnosis Of Asymptomatic Leishmania Infantum-Infected Dogs. Plos Negl Trop Dis 2015; 9(1): e3429. [DOI:10.1371/journal.pntd.0003429]
4. Oliveira GG, Magalhães FB, Teixeira MC, et al. Characterization Of Novel Leishmania Infantum Recombinant Proteins Encoded By Genes From Five Families With Distinct Capacities For Serodiagnosis Of Canine And Human Visceral Leishmaniasis. Am J Trop Med Hyg 2011; 85(6): 1025-34. [DOI:10.4269/ajtmh.2011.11-0102]
5. Alibakhshi A, Bandehpour M, Kazemi B. Cloning, Expression And Purification Of A Polytopic Antigen Comprising Of Surface Antigens Of Toxoplasma Gondii. Iran J Microbiol 2017; 9(4): 251-6.
6. Liu ZQ, Yang PC. Construction Of Pet-32 Α (+) Vector For Protein Expression And Purification. N Am J Med Sci 2012; 4(12): 651-5. [DOI:10.4103/1947-2714.104318]
7. Rietsch A, Belin D, Martin N, et al. An In Vivo Pathway For Disulfide Bond Isomerization In Escherichia Coli. Proc Natl Acad Sci U S A 1996; 93(23): 13048-53. [DOI:10.1073/pnas.93.23.13048]
8. Mierendorf RC, Morris BB, Hammer B, et al. Expression And Purification Of Recombinant Proteins Using The pET System. Totowa NJ: Humana Press, The Nucleic Acid Protocols Handbook, 2000, 947-77. [DOI:10.1385/1-59259-038-1:947]
9. Geum L, Huber R, Leung N, et al. Construction Of Recombinant Expression Vectors To Study The Effect Of Thioredoxin On Heterologous Protein Solubility. J Microbiol Immunol Infect 2015; 19: 1-5.
10. Chen X, Zaro JL, Shen WC. Fusion Protein Linkers: Property, Design And Functionality. Adv Drug Deliv Rev 2013; 65(10): 1357-69. [DOI:10.1016/j.addr.2012.09.039]
11. Sadeghi M, Doosti A. Cloning And Study Of Expression Of Helicobacter Pylori FlaAgene In Eukaryotic System. Iran South Med J 2017; 20(3): 245-56. (Persian)
12. Lizier M, Sarra PG, Cauda R, et al. Comparison Of Expression Vectors In Lactobacillus Reuteri Strains. FEMS Microbiol Lett 2010; 308(1): 8-15. [DOI:10.1111/j.1574-6968.2010.01978.x]
13. Mahmood N, Xie J. An Endogenous 'NonSpecific' Protein Detected By A His-Tag Antibody Is Human Transcription Regulator YY1. Data Brief 2015; 2: 52-5. [DOI:10.1016/j.dib.2014.12.002]
14. Western Blot Troubleshooting: Unusual or Unexpected Bands. Western Blot Troubleshooting: Unusual or Unexpected Bands BioRad. (Accessed June 27, 2020, at https://www.bio-rad-antibodies.com/westernblot-unusual-unexpected-bands-western-blotting.html)
15. Tobias AM, Toska D, Lange K, et al. Expression, Purification, And Inhibition Profile Of Dihydrofolate Reductase From The Filarial Nematode Wuchereria Bancrofti. PloS One 2018; 13(5): e0197173. [DOI:10.1371/journal.pone.0197173]
16. Wang J, LI Y, Guo F, et al. Expression And Activity Identification Of A Human Nasopharyngeal Carcinoma I50 Anti-Idiotype Antibody. Zhong Nan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban 2011; 36(3): 185-91.
17. Lu Q, Li X, Zhao J, et al. Nanobody-Horseradish Peroxidase And-EGFP Fusions As Reagents To Detect Porcine Parvovirus In The Immunoassays. J Nanobiotechnol 2020; 18(1): 7. [DOI:10.1186/s12951-019-0568-x]
18. Lee HB, Piao DC, Lee JY, et al. Artificially Designed Recombinant Protein Composed Of Multiple Epitopes Of Foot-And-Mouth Disease Virus As A Vaccine Candidate. Microb Cell Fact 2017; 16(1): 33. [DOI:10.1186/s12934-017-0648-2]
19. Wang X, Xie G, Liao J, et al. Design And Evaluation Of A Multi-Epitope Assembly Peptide (MEAP) Against Herpes Simplex Virus Type 2 Infection In BALB/c Mice. Virol J 2011; 8: 232. [DOI:10.1186/1743-422X-8-232]
20. Boarino A, Scalone A, Gradoni L, et al. Development Of Recombinant Chimeric Antigen Expressing Immunodominant B Epitopes Of Leishmania Infantum For Serodiagnosis Of Visceral Leishmaniasis. Clin Diagn Lab Immunol 2005; 12(5): 647-53. [DOI:10.1128/CDLI.12.5.647-653.2005]
21. Jaramillo Ortiz JM, Montenegro VN, De La Fournière SA, et al. Development Of An Indirect ELISA Based On A Recombinant Chimeric Protein For The Detection Of Antibodies Against Bovine Babesiosis. Vet Sci 2018; 5(1): 13. [DOI:10.3390/vetsci5010013]
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
