[صفحه اصلی ]   [Archive] [ English ]  
:: صفحه اصلي :: درباره نشريه :: آخرين شماره :: تمام شماره‌ها :: جستجو :: ثبت نام :: ارسال مقاله :: تماس با ما ::
:: دوره 20، شماره 3 - ( دو ماهنامه طب جنوب 1396 ) ::
جلد 20 شماره 3 صفحات 245-256 برگشت به فهرست نسخه ها
کلونینگ و بررسی بیان ژن flaA هلیکوباکتر پیلوری در سیستم یوکاریوتی
محترم صادقی1، عباس دوستی *2
1- مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران
2- مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران ، abbasdoosti@yahoo.com
چکیده:   (606 مشاهده)

زمینه: هلیکوباکتر پیلوری شایع‌ترین باکتری است که جوامع انسانی را در ابعاد جهانی مبتلا به عفونت ساخته است. بیان فلاژل و تحرک باکتری در کلونیزاسیون و ویرولانس آن عامل بسیار مهمی است. ژن flaA یکی از ژن‌های کد کننده فلاژلین می‌باشد که نقش کلیدی در حرکت باکتری و کلونیزاسیون آن دارد و از نظر ایمنی بخشی نیز مورد توجه می‌باشد. هدف از این مطالعه طراحی، ساخت سازواره و بررسی بیان ژن flaA هلیکوباکتر پیلوری در سلول‌های یوکاریوتی است.

موادوروش‌ها: در این مطالعه تجربی، ابتدا از هلیکوباکتر پیلوری سویه استاندارد، DNA ژنومی تخلیص و ژن flaA با پرایمرهای اختصاصی به روش PCR تکثیر و جداسازی شد. سپس با بهره‌گیری از تکنیک همسانه سازی T/A در پلاسمید pTZ کلون گردید. به منظور بیان ژن flaA و ایجاد سازواره نهایی، ژن flaA از پلاسمید pTZ خارج شد و در وکتور بیانی (-)pcDNA3.1 ساب کلون گردید. سازواره -flaA(-)pcDNA3.1 به روش الکتروپوریشن به سلول جانوری CHO منتقل و بیان یوکاریوتی ژن flaA با تکنیک
SDS-PAGE بررسی شد.

یافته‌ها: نتایج نشان می‌دهد محصول PCR ژن flaA در وکتور pTZ کلون و در باکتری اشریشیا کلای سویه TOP10F تکثیر یافته است. همچنین هضم آنزیمی و تعیین توالی حاکی از تشکیل سازواره نهایی -flaA(-)pcDNA3.1 است. در نهایت بررسی بیان ژن flaA هلیکوباکتر پیلوری در سلول جانوری CHO، نشان داد سازواره ژنی حاصل قادر به بیان موفق محصول ژن flaA در سیستم یوکاریوتی می‌باشد.

نتیجه‌گیری: با توجه به اینکه سازواره نهایی -flaA(-)pcDNA3.1 قادر به بیان محصول پروتئینی ژن flaA هلیکوباکتر پیلوری در سلول‌های جانوری می‌باشد و پروتئین فلاژلین یکی از آنتی ژن‌های مهم این باکتری است. بنابراین به درستی می‌توان گفت که سازواره ژنی
-flaA(-)pcDNA3.1 کاندیدای مناسبی برای استفاده در زمینه واکسن‌های ژنی علیه هلیکوباکتر پیلوری می‌باشد و در تحقیقات آینده می‌توان از آن برای بررسی ایمنی زایی در حیوانات آزمایشگاهی بهره گرفت.

واژه‌های کلیدی: هلیکوباکتر پیلوری، ژن flaA، کلون‌سازی، الکتروپوریشن
متن کامل [PDF 792 kb]   (179 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: بیوشیمی
دریافت: ۱۳۹۶/۴/۱۴ | پذیرش: ۱۳۹۶/۴/۱۴ | انتشار: ۱۳۹۶/۴/۱۴
فهرست منابع
1. Doosti A, Rahimian GA, Nassiri J, et al. Prevalence of the cagA-positive Helicobacter pylori strains isolated from gastric biopsy specimens in Shahrekord. Armaghane Danesh 2007; 12(1): 29-38. (Persian) [Google Scholar]
2. Kusters JG, van Vliet AH, Kuipers EJ. Pathogenesis of Helicobacter pylori infection. Clin Microbiol Rev 2006; 19(3): 449-90. [Google Scholar]
3. Souod N, Kargar M, Doosti A, et al. Genetic Analysis of cagA and vacA Genes in Helicobacter Pylori Isolates and their relationship with Gastroduodenal diseases in the west of Iran.Iran Red Crescent Med J 2013; 15(5): 371-5. [PubMed]
4. Pakbaz Z, Shirazi MH, Pourmand MR, et al. Evaluation of Rapid Urease Test Compared with Polymerase Chain Reaction for Diagnosis of Helicobacter pylori. Iran South Med J 2014; 16(6): 394-400. (Persian). [Google Scholar]
5. Kargar M, Ghorbani-Dalini S, Doosti A, et al. Real-Time PCR assay using allele-specific TaqMan probe for detection of clarithromycin resistance and its point mutations in Helicobacter pylori. J Isfahan Med Sch 2011; 29(126): 65-73. (Persian) [Google Scholar]
6. Haggerty TD, Perry S, Sanchez L, et al. Significance of transiently positive enzyme-linked immunosorbent assay results in detection of Helicobacter pylori in stool samples from children. J Clin Microbiol 2005; 43(5): 2220-3. [PubMed] [Google Scholar]
7. Kargar M, Baghernejad M, Doosti A. Role of NADPH-insensitive nitroreductase gene to metronidazole resistance of Helicobacter pylori strains.Daru 2010; 18(2): 137-40. [PubMed]
8. Haiko J, Westerlund-Wikström B.The role of the bacterial flagellum in adhesion and virulence.Biology (Basel) 2013; 2(4): 1242-67. [PubMed]
9. Kikuchi S, Crabtree JE, Forman D, et al. Association between infections with CagA-positive or -negative strains of Helicobacter pylori and risk for gastric cancer in young adults. Research Group on Prevention of Gastric Carcinoma Among Young Adults. Am J Gastroenterol 1999; 94(12): 3455-9. [PubMed] [Google Scholar]
10. Kao CY, Sheu BS, Wu JJ. CsrA regulates Helicobacter pylori J99 motility and adhesion by controlling flagella formation. Helicobacter 2014; 19(6): 443-54. [PubMed] [Google Scholar]
11. Tomb JF, White O, Kerlavage AR, et al. The complete genome sequence of the gastric pathogen Helicobacter pylori. Nature 1997; 388(6642): 539-47. [PubMed] [Google Scholar]
12. Chaban B, Ng SY, Kanbe M, et al. Systematic deletion analyses of the fla genes in the flagella operon identify several genes essential for proper assembly and function of flagella in the archaeon, Methanococcus maripaludis. Mol Microbiol 2007; 66(3): 596-609. [PubMed] [Google Scholar]
13. Häse CC. Analysis of the role of flagellar activity in virulence gene expression in Vibrio cholerae. Microbiology 2001; 147(Pt 4): 831-7. [PubMed] [Google Scholar]
14. Mizel SB, Bates JT. Flagellin as an adjuvant: cellular mechanisms and potential. J Immun 2010; 185(10): 5677-82. [PubMed] [Google Scholar]
15. Lee SK, Stack A, Katzowitsch E, et al. Helicobacter pylori flagellins have very low intrinsic activity to stimulate human gastric epithelial cells via TLR5. Microbes Infect 2003; 5(15): 1345-56. [PubMed] [Google Scholar]
16. Wheeldon TU, Hoang TT, Phung DC, et al. Long-term follow-up of Helicobacter pylori eradication therapy in Vietnam: reinfection and clinical outcome. Aliment Pharmacol Ther 2005; 21(8): 1047-53. [PubMed] [Google Scholar]
17. Doosti A, Ghaasemi-Dehkordi P, Kargar M, et al. Generation of divalent DNA vaccine based on p39 and shiga-like toxin 2 (stx2) gene. Genetika 2015; 47(2): 499-507. [Google Scholar]
18. Doosti A. Cloning of the gene encoding neurotoxin heavy chain of Clostridium botulinum in E. coli. J Microbial World 2013; 5(3): 77-84. (Persian) [Google Scholar]
19. Talebi Bezmin Abadi A. Vaccine against Helicobacter pylori: inevitable approach. World J Gastroenterol 2016; 22(11): 3150-7. [PubMed] [Google Scholar]
20. Kabir S. The current status of Helicobacter pylori vaccines: a review. Helicobacter 2007; 12(2): 89-102. [PubMed] [Google Scholar]
21. Yan J, Liang SH, Mao YF, et al. Construction of expression systems for flaA and flaB genes of Helicobacter pylori and determination of immunoreactivity and antigenicity of recombinant proteins. World J Gastroenterol 2003; 9(10): 2240-50. [PubMed] [Google Scholar]
22. Mori J, Vranac T, Smrekar B, et al. Chimeric flagellin as the self-adjuvanting antigen for the activation of immune response against Helicobacter pylori. Vaccine 2012; 30(40): 5856-63. [PubMed] [Google Scholar]
23. Yeh HY, Hiett KL, Line JE, et al. Construction, expression, purification and antigenicity of recombinant Campylobacter jejuni flagellar proteins. Microbiol Res 2013; 168(4): 192-8. [PubMed] [Google Scholar]
24. Yuan Y, Wang X, Guo S, et al. Gene cloning and prokaryotic expression of recombinant flagellin A from Vibrio parahaemolyticus. Chinese J Oceanol Limnol 2010; 28(6): 1254-60. [Google Scholar]
ارسال پیام به نویسنده مسئول

ارسال نظر درباره این مقاله
نام کاربری یا پست الکترونیک شما:

کد امنیتی را در کادر بنویسید >



XML   English Abstract   Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Sadeghi M, Doosti A. Cloning and Study of Expression of Helicobacter Pylori FlaAGene in Eukaryotic System . Iran South Med J. 2017; 20 (3) :245-256
URL: http://ismj.bpums.ac.ir/article-1-876-fa.html
صادقی محترم، دوستی عباس. کلونینگ و بررسی بیان ژن flaA هلیکوباکتر پیلوری در سیستم یوکاریوتی . طب جنوب. 1396; 20 (3) :245-256

URL: http://ismj.bpums.ac.ir/article-1-876-fa.html

دوره 20، شماره 3 - ( دو ماهنامه طب جنوب 1396 ) برگشت به فهرست نسخه ها
دانشگاه علوم پزشکی بوشهر، طب جنوب ISMJ

Iranian South Medical Journal is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License which allows users to read,
copy, distribute and make derivative works for non-commercial purposes from the material, as long as the author of the original work is cited properly

Copyright © 2017, Iranian South Medical Journal| All Rights Reserved

Persian site map - English site map - Created in 0.062 seconds with 817 queries by yektaweb 3506