[صفحه اصلی ]   [Archive] [ English ]  
:: صفحه اصلي :: درباره نشريه :: آخرين شماره :: تمام شماره‌ها :: جستجو :: ارسال مقاله :: تماس با ما ::
:: دوره 17، شماره 4 - ( دو ماهنامه طب جنوب 1393 ) ::
جلد 17 شماره 4 صفحات 516-523 برگشت به فهرست نسخه ها
بیان و تخلیص دو پروتئین نوترکیب DnaK و Omp31 بروسلا ملی تنسیس و جداسازی اندوتوکسین همراه آن‌ها
امیر قاسمی1، محمدحسین سالاری2، امیر حسن زرنانی3، محمود جدی‌تهرانی4
1- گروه پاتوبیولوژی، دانشکده بهداشت، دانشگاه علوم پزشکی تهران
2- گروه پاتوبیولوژی، دانشکده بهداشت، دانشگاه علوم پزشکی تهران ، mhsalari2002@gmail.com
3- پژوهشکده نانوتکنولوژی، پژوهشگاه فناوری‌های نوین ابن‌سینا، جهاد دانشگاهی تهران
مرکز تحقیقات ایمونولوژی، دانشگاه علوم پزشکی ایران
4- پژوهشکده مونوکلونال آنتی‌بادی، پژوهشگاه فناوری‌های نوین ابن‌سینا، جهاد دانشگاهی تهران
چکیده:   (3463 مشاهده)

زمینه: امروزه به‌دلیل مشکلاتی که سوش واکسن بروسلا ملی تنسیس ایجاد می‌کند، توسعه واکسن ساب یونیتی با استفاده از پروتئین‌های نوترکیب مد نظر است. علی‌رغم به‌دست آمدن پروتئین‌های نوترکیب با بیش‌تر از 95 درصد خلوص، این پروتئین‌ها هنوز حاوی میزان زیاد و مشخصی از اندوتوکسین هستند. اندوتوکسین‌ها، لیپوپلی‌ساکاریدهایی همراه با غشاء بیرونی باکتری‌های گرم منفی هستند. سمیت ذاتی این لیپوپلی ساکاریدها دارای یک اثری شاخص بر روی رخدادهای بیوشیمیایی بعضی از سلول‌ها از جمله سلول‌های ایمنی هستند و می‎توانند در آزمایش‌های انجام شده در شرایط آزمایشگاه تداخل ایجاد کنند. مواد و روش‌ها: پلاسمیدهای بیانی حاوی دوژن dnakوomp31 به‌درون باکتری (DE3)E.coli Bl21 ترانسفورم شد. بعد پس از انتخاب کلونی مناسب با استفاده از روش وسترن بلات محلولیت و عدم محلولیت هر کدام معین شد. سپس بعد از بیان در 20 درجه به‌مدت 22 ساعت با استفاده از روش Ni-NTA آگاروز و روش تخلیص با استفاده از اوره، پروتئین‌های نوترکیب تخلیص گردید. در هنگام شستشو Ni-NTA agarose هم از روش همراه با دترجنت Triton X-114 و هم بدون آن (استاندارد) استفاده شد. یافته‌ها: در این مطالعه میزان 20 و 8 میلی‌گرم از پروتئین‌های نوترکیب DnaK و Omp31 به‌ترتیب با استفاده از روش استاندارد به‌دست آمد در حالی‌که در روشی که دترجنت استفاده شده بود، این میزان 20 درصد افت داشت. اما در عوض میزان اندوتوکسین در محصول نهایی به‌میزان بسیار زیادی جدا شده بود و به کمتر از EU 05/0 میلی‌گرم در لیتر رسید. نتیجه‌گیری: روش به‌کار رفته در این مطالعه می‌تواند به‌عنوان روشی مناسب به‌منظور بیان، تخلیص و جدا سازی از محصول پروتئین نوترکیب نهایی برای تمام پروتئین‌های با خصوصیات فیزیولوژیکی مشابه به‌کار رود.

واژه‌های کلیدی: پروتئین نوترکیب، تخلیص، اندوتوکسین، بیان
متن کامل [PDF 495 kb]   (1648 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: عمومى
دریافت: ۱۳۹۳/۵/۲۰ | پذیرش: ۱۳۹۳/۵/۲۰ | انتشار: ۱۳۹۳/۵/۲۰
ارسال پیام به نویسنده مسئول

ارسال نظر درباره این مقاله
نام کاربری یا پست الکترونیک شما:

CAPTCHA


XML   English Abstract   Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Ghasemi A, Salari M H, Zarnani A H, Jeddi-Tehrani M. Expression, Purfication and endotoxin removal of Brucella melitensis DnaK and Omp31 proteins. Iran South Med J. 2014; 17 (4) :516-523
URL: http://ismj.bpums.ac.ir/article-1-567-fa.html

قاسمی امیر، سالاری محمدحسین، زرنانی امیر حسن، جدی‌تهرانی محمود. بیان و تخلیص دو پروتئین نوترکیب DnaK و Omp31 بروسلا ملی تنسیس و جداسازی اندوتوکسین همراه آن‌ها. طب جنوب. 1393; 17 (4) :516-523

URL: http://ismj.bpums.ac.ir/article-1-567-fa.html



دوره 17، شماره 4 - ( دو ماهنامه طب جنوب 1393 ) برگشت به فهرست نسخه ها
دانشگاه علوم پزشکی بوشهر، طب جنوب ISMJ

Iranian South Medical Journal is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License which allows users to read,
copy, distribute and make derivative works for non-commercial purposes from the material, as long as the author of the original work is cited properly

Copyright © 2017, Iranian South Medical Journal| All Rights Reserved

Persian site map - English site map - Created in 0.06 seconds with 32 queries by YEKTAWEB 4071