[صفحه اصلی ]   [Archive] [ English ]  
:: صفحه اصلي :: درباره نشريه :: آخرين شماره :: تمام شماره‌ها :: جستجو :: ارسال مقاله :: تماس با ما ::
:: دوره 17، شماره 6 - ( دو ماهنامه طب جنوب 1393 ) ::
جلد 17 شماره 6 صفحات 1168-1175 برگشت به فهرست نسخه ها
کلون و بیان فوتوپروتئین اکورین با استفاده از دنباله اینتئین
الهه سادات سیدحسینی1، مهدی زین الدینی2، جلیل فلاح1، علی رضا سعیدی نیا1
1- پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران
2- پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران ، zeinoddini52@mut.ac.ir
چکیده:   (3580 مشاهده)

زمینه: اینتئین (INT) بخش‌های درونی پروتئین است که می‌تواند در طی فرایند پیرایش پروتئین، خود را از پروتئین نابالغ جداکند. این توالی برای جدا شدن، احتیاج به آنزیم یا کوفاکتور خاصی ندارد. از این توالی پروتئینی و ویژگی برش خود به خودی آن، در اثر اعمال تغییر دما، pH و یا القای تیولی در جهت تخلیص پروتئین استفاده می‌شود. مزیت این روش نسبت به بقیه روش‌های تخلیص پروتئین، عدم احتیاج به آنزیم‌های پروتئازی و مراحل حذف پروتئاز می‌باشد که این روش را از لحاظ اقتصادی حائز اهمیت می‌کند. در تحقیق حاضر فوتوپروتئین اکورین به‌صورت ملکولی با INT هیبرید شده و میزان بیان آن مورد ارزیابی قرار گرفته است.

مواد و روش‌ها: در این تحقیق ژن رمز کننده اکورین که در مطالعات قبلی درون وکتور pET21a کلون شده بود با استفاده از پرایمرها و آنزیم‌های محدودگر اختصاصی درون وکتور pTYB21، که حاوی دنباله INT است، کلون گردید. سپس وکتور pTY-aequorin حاصله به باکتری E.coli سویه بیانی ER2566 انتقال داده شد و با تکنیک‌های الکتروفورز (Electerophoresis)، وسترن بلات (Western Blot) و تعیین ترادف (Sequencing)، صحت کلون‌ها بررسی گردید.

یافته‌ها: ژن به رمز درآورنده فوتوپروتئین اکورین بین جایگاه های آنزیمی SapI و PstI درون وکتور pTYB21 به‌صورت صحیح کلون گردید و بیان پروتئین هیبریدی اکورین- اینتئین با استفاده از روش‌های مرسوم تأیید گردید.

نتیجه‌گیری: ساخت سازه ژنی فوتوپروتئین اکورین، در حالت هیبریدی و متصل به INT با استفاده از روش‌های ملکولی تأیید شد. همچنین میزان بیان اکورین در حالت متصل شده با INT، درصد بیان بیش از 25 درصد مجموعه پروتئین‌های سلولی را نشان می‌دهد.

واژه‌های کلیدی: اینتئین، پیرایش پروتئین، کلون، بیان، فوتوپروتئین اکورین
متن کامل [PDF 670 kb]   (1323 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: بیوشیمی
دریافت: ۱۳۹۳/۹/۲۷ | پذیرش: ۱۳۹۳/۹/۲۷ | انتشار: ۱۳۹۳/۹/۲۷
ارسال پیام به نویسنده مسئول

ارسال نظر درباره این مقاله
نام کاربری یا پست الکترونیک شما:

CAPTCHA


XML   English Abstract   Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Seyed Hosseini E S, Zeinoddini M, Fallah Z, Saeedinia A. Cloning and expression of aequorin photoprotein using intein tag. Iran South Med J. 2015; 17 (6) :1168-1175
URL: http://ismj.bpums.ac.ir/article-1-633-fa.html

سیدحسینی الهه سادات، زین الدینی مهدی، فلاح جلیل، سعیدی نیا علی رضا. کلون و بیان فوتوپروتئین اکورین با استفاده از دنباله اینتئین. طب جنوب. 1393; 17 (6) :1168-1175

URL: http://ismj.bpums.ac.ir/article-1-633-fa.html



دوره 17، شماره 6 - ( دو ماهنامه طب جنوب 1393 ) برگشت به فهرست نسخه ها
دانشگاه علوم پزشکی بوشهر، طب جنوب ISMJ

Iranian South Medical Journal is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License which allows users to read,
copy, distribute and make derivative works for non-commercial purposes from the material, as long as the author of the original work is cited properly

Copyright © 2017, Iranian South Medical Journal| All Rights Reserved

Persian site map - English site map - Created in 0.06 seconds with 32 queries by YEKTAWEB 4030